| 缩写词 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 文献综述 | 第11-34页 |
| 龙眼体细胞胚胎发生过程中的基因差别表达研究 | 第34-78页 |
| 第一章 龙眼体细胞胚胎发生及其同步化调控 | 第34-37页 |
| 1 材料与方法 | 第34页 |
| ·供试材料 | 第34页 |
| ·方法 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-37页 |
| 第二章 龙眼体胚发生过程中基因在转录水平的差别表达 | 第37-52页 |
| 第一节 龙眼胚性培养物DNA及RNA的提取与RT-PCR基本反应体系的建立 | 第37-44页 |
| 1 材料与方法 | 第37-40页 |
| ·供试材料 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·DNA的提取 | 第37页 |
| ·RNA的提取 | 第37-39页 |
| ·龙眼胚性培养物RT-PCR技术体系的建立 | 第39-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-44页 |
| ·龙眼胚性培养物DNA的提取方法 | 第40-42页 |
| ·龙眼胚性培养物RNA的提取方法 | 第42-43页 |
| ·龙眼胚性离体培养物RT-PCR技术体系的建立 | 第43-44页 |
| 第二节 mRNA差别显示体系的建立 | 第44-47页 |
| 1 材料与方法 | 第44-45页 |
| ·供试材料 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-45页 |
| ·RNA的提取及反转录 | 第44页 |
| ·DD-PCR条件优化 | 第44-45页 |
| 2 结果分析 | 第45-47页 |
| ·Mg~(2+)浓度对DD-PCR反应的影响 | 第45页 |
| ·dNTP浓度对DD-PCR反应的影响 | 第45-46页 |
| ·5’端随机引物数对DD-PCR反应的影响 | 第46页 |
| ·退火温度对DD-PCR反应的影响 | 第46-47页 |
| 第三节 龙眼体细胞胚胎发生过程的mRNA差别显示分析 | 第47-52页 |
| 1 材料与方法 | 第47-49页 |
| ·供试材料 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-49页 |
| ·龙眼胚性离体培养物RNA的提取及反转录 | 第47页 |
| ·PCR反应条件和程序 | 第47-48页 |
| ·龙眼体细胞胚胎发生的差异表达片段的回收 | 第48-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-52页 |
| ·采用试剂盒提取龙眼体细胞胚胎发生各阶段胚性培养物总RNA | 第49页 |
| ·26条5’端随机引物(两条一组)和3条3’端锚定引物配对筛选 | 第49-51页 |
| ·龙眼体细胞胚胎发生过程中特异表达基因片段 | 第51-52页 |
| 第三章 龙眼体细胞胚胎发生过程中差异cDNA片段的克隆及阳性差异片段的鉴定 | 第52-64页 |
| 第一节 差异片段二次扩增及克隆 | 第52-57页 |
| 1 材料与方法 | 第52-55页 |
| ·供试材料 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-55页 |
| ·差异片段二次PCR扩增 | 第52页 |
| ·差异片段克隆 | 第52-53页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第53-55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-57页 |
| ·差异片段二次PCR扩增 | 第55页 |
| ·龙眼体细胞胚胎发生中的差异cDNA片段克隆 | 第55-56页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第56-57页 |
| 第二节 差异片段的Northern blot和反Northern blot鉴定 | 第57-64页 |
| 1 材料与方法 | 第57-59页 |
| ·供试材料 | 第57页 |
| ·方法 | 第57-59页 |
| ·RNA的提取及反转录 | 第57页 |
| ·探针的PCR标记 | 第57页 |
| ·Northern blot和反Northern blot(斑点杂交) | 第57-58页 |
| ·RNA转膜杂交 | 第58-59页 |
| ·测序 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-64页 |
| ·龙眼体细胞胚胎发生差异表达片段鉴定(Northern blot) | 第59-60页 |
| ·龙眼体细胞胚胎发生差异表达片段鉴定(转膜杂交) | 第60页 |
| ·龙眼体细胞胚胎发生差异表达片段鉴定(反Northern blot) | 第60-62页 |
| ·阳性差异片段碱基序列分析 | 第62-64页 |
| 第四章 龙眼体细胞胚胎发生中翻译水平的基因差别表达研究 | 第64-73页 |
| 第一节 与龙眼胚性培养物蛋白质水平双向电泳体系的建立 | 第64-69页 |
| 1 材料与方法 | 第64-67页 |
| ·供试材料 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-67页 |
| ·蛋白的制备 | 第64页 |
| ·电泳 | 第64页 |
| ·第一向等电聚焦水平电泳体系的建立 | 第64-66页 |
| ·第二向SDS-PAGE水平电泳体系的建立 | 第66-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-69页 |
| ·不同电泳条件对IEF水平电泳的影响 | 第67-68页 |
| ·不同凝胶对龙眼胚性培养物SDS-PAGE水平电泳的影响 | 第68-69页 |
| 第二节 应用蛋白质水平双向电泳体系研究龙眼体细胞胚胎发生中的特异蛋白 | 第69-73页 |
| 1 材料与方法 | 第69-70页 |
| ·供试材料 | 第69页 |
| ·方法 | 第69-70页 |
| ·蛋白的制备及双向电泳 | 第69页 |
| ·等电点的测定 | 第69页 |
| ·分子量的测定 | 第69-70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-73页 |
| ·龙眼体细胞胚胎发育不同时期的蛋白质等电点的变化 | 第70页 |
| ·龙眼体细胞胚胎不同发育时期的蛋白质双向电泳图谱及发育特异蛋白 | 第70-73页 |
| 第五章 讨论 | 第73-78页 |
| 1 适用于胚性培养物DNA提取的方法 | 第73-74页 |
| 2 mRNA差别显示体系的改进 | 第74-75页 |
| 3 龙眼体细胞胚胎发生过程中基因的差别表达 | 第75页 |
| 4 longan1在龙眼体细胞胚胎发生过程中的表达与功能 | 第75-76页 |
| 5 mRNA差别显示技术在果树发育基因分离研究中的应用 | 第76-77页 |
| 6 longan1基因今后的研究与应用展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-91页 |
| 附录Ⅰ | 第91-93页 |
| 附录Ⅱ | 第93-98页 |
| 在学期间发表的相关论文 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
