| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-9页 |
| 1 前言 | 第9-38页 |
| ·真核模式生物酵母的耐盐机制研究进展 | 第9-18页 |
| ·外界盐信号的传导途径 | 第10-12页 |
| ·盐胁迫应答的分子机制 | 第12-14页 |
| ·盐胁迫下基因组转录应答模式与功能组 | 第14-17页 |
| ·酵母中耐盐基因的研究方法 | 第17页 |
| ·展望 | 第17-18页 |
| ·植物耐盐机制研究进展 | 第18-28页 |
| ·植物盐胁迫信号传导 | 第18-21页 |
| ·植物盐胁迫应答的分子机制 | 第21-28页 |
| ·基因克隆的方法 | 第28-38页 |
| ·功能克隆 | 第28-29页 |
| ·定位克隆 | 第29页 |
| ·转座子标记法 | 第29-30页 |
| ·人工合成并克隆基因 | 第30页 |
| ·表型克隆 | 第30页 |
| ·依据序列同源性克隆基因 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增克隆 | 第31页 |
| ·mRNA差异显示反转录PCR技术 | 第31-32页 |
| ·cDNA示差分析 | 第32-34页 |
| ·抑制性消减杂交 | 第34-36页 |
| ·利用基因芯片技术分离目的基因 | 第36-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-60页 |
| ·菌种和质粒载体及植物材料 | 第38页 |
| ·药品及试剂 | 第38-40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-59页 |
| ·酵母DNA的微量制备 | 第40-41页 |
| ·PCR反应体系 | 第41-42页 |
| ·DNA片段琼脂糖凝胶回收 | 第42页 |
| ·T-A连接体系 | 第42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第43页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第43-44页 |
| ·BamHI酶切体系 | 第44页 |
| ·连接体系(粘末端) | 第44-45页 |
| ·三亲杂交 | 第45页 |
| ·农杆菌中HAL1基因植物表达载体质粒的鉴定 | 第45页 |
| ·烟草无菌苗的萌发 | 第45-46页 |
| ·农杆菌介导的HAL1基因叶圆盘法转化烟草 | 第46页 |
| ·转HAL1基因烟草的基因组总DNA提取 | 第46页 |
| ·转HAL1基因烟草的PCR鉴定及PCR-Southern鉴定 | 第46-47页 |
| ·对照烟草植株的耐盐性评价 | 第47页 |
| ·转HAL1基因烟草的耐盐性评价 | 第47页 |
| ·酵母RNA的提取 | 第47-49页 |
| ·RNA纯化方法 | 第49-50页 |
| ·mRNA的分离 | 第50-51页 |
| ·鲁氏酵母盐诱导抑制性消减杂交EST的克隆与分析 | 第51-57页 |
| ·测序分析 | 第57-59页 |
| ·分析软件 | 第59-60页 |
| 3 研究结果 | 第60-91页 |
| ·酿酒酵母HAL1基因的克隆及转化烟草的研究 | 第60-75页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第60页 |
| ·HAL1基因序列的限制性酶切位点的分析与引物设计 | 第60-61页 |
| ·HAL1基因的PCR扩增 | 第61页 |
| ·扩增产物的克隆和分析 | 第61-63页 |
| ·HAL1基因的序列测定结果 | 第63-66页 |
| ·HAL1基因植物表达载体的构建 | 第66-67页 |
| ·三亲杂交转化根癌农杆菌及其鉴定 | 第67-68页 |
| ·烟草无菌苗叶片对头孢唑啉钠的敏感试验 | 第68-69页 |
| ·烟草叶片对卡那霉素的敏感性试验 | 第69页 |
| ·农杆菌介导的HAL1基因叶圆盘法转化烟草植株 | 第69-70页 |
| ·转HAL1基因烟草的PCR鉴定及PCR-Southern鉴定 | 第70页 |
| ·对照烟草植株的耐盐性评价 | 第70-73页 |
| ·转HAL1基因烟草植株的耐盐性评价 | 第73-75页 |
| ·鲁氏酵母盐诱导抑制性消减杂交文库的构建与盐胁迫应答ESTs的表达分析 | 第75-91页 |
| ·酵母RNA提取方法的评价 | 第75-76页 |
| ·鲁氏接合酵母的cDNA检测 | 第76-77页 |
| ·cDNA的RsaⅠ酶切消化 | 第77页 |
| ·消减杂交cDNA产物的PCR扩增 | 第77-78页 |
| ·盐诱导表达ESTs的克隆 | 第78页 |
| ·消减文库ESTs片段重组质粒的提取和测序 | 第78-80页 |
| ·盐胁迫应答差异表达ESTs片段的序列同源性分析 | 第80-91页 |
| 4 讨论 | 第91-112页 |
| ·酵母耐盐基因的研究在植物耐盐基因研究中的重要作用 | 第91页 |
| ·HAL1基因的PCR法克隆策略 | 第91-94页 |
| ·植物耐盐基因工程中耐盐基因的作用评价 | 第94-100页 |
| ·HAL1基因在植物耐盐基因工程中的作用 | 第100-103页 |
| ·盐诱导差异表达基因的克隆策略与表达策略 | 第103-107页 |
| ·酵母RNA提取的难点与对策 | 第107-110页 |
| ·SSH技术路线的选择 | 第110-111页 |
| ·影响消减杂交效率的因素 | 第111-112页 |
| 5 结论 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
