| 内容提要 | 第1-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-30页 |
| 1 Bikunin 的基因与蛋白质结构 | 第9-11页 |
| ·bikunin 基因结构特点 | 第9页 |
| ·Bikunin 质结构特点 | 第9-11页 |
| 2 Bikunin 的生物学作用 | 第11-17页 |
| ·Bikunin 在炎症中的作用 | 第11-13页 |
| ·Bikunin 在肿瘤细胞浸润和转移中的作用 | 第13-15页 |
| ·Bikunin 对缺血-再灌注损伤的保护性作用 | 第15-17页 |
| 3 Bikunin 的临床应用 | 第17-19页 |
| ·在治疗炎症中的应用 | 第17页 |
| ·在治疗休克中的应用 | 第17-18页 |
| ·在手术和体外循环中的应用 | 第18-19页 |
| 4 基因工程表达系统 | 第19-24页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第19-20页 |
| ·昆虫细胞表达系统 | 第20-21页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统 | 第21-22页 |
| ·植物生物反应器 | 第22-23页 |
| ·酵母表达系统 | 第23-24页 |
| 5 巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第24-30页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的广泛应用 | 第24-25页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统对外源蛋白表达的影响 | 第25-30页 |
| 第二章 重组人Bikunin 在毕赤酵母中的表达及大规模制备 | 第30-64页 |
| 1 材料与方法 | 第31-47页 |
| ·材料 | 第31-34页 |
| ·rhBikunin 表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第36-37页 |
| ·阳性菌株的筛选 | 第37-38页 |
| ·rhBikunin 发酵培养基pH 值优化 | 第38-39页 |
| ·表达产物的分析 | 第39-42页 |
| ·利用80 L 发酵罐大规模发酵表达rhBikunin | 第42-43页 |
| ·rhBikunin 的纯化 | 第43-44页 |
| ·rhBikunin 的糖基化分析 | 第44页 |
| ·rhBikunin 的理化性质分析 | 第44-45页 |
| ·rhBikunin 对纤溶酶的抑制作用分析 | 第45-47页 |
| 2 结果 | 第47-56页 |
| ·rhBikunin 表达载体的构建 | 第47页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第47-49页 |
| ·发酵条件的优化 | 第49-50页 |
| ·rhBikunin 的分析鉴定 | 第50-51页 |
| ·rhBikunin 的大规模发酵与纯化 | 第51-52页 |
| ·rhBikunin 的糖基化分析 | 第52-53页 |
| ·rhBikunin 的理化性质分析 | 第53-54页 |
| ·rhBikunin 对纤溶酶的抑制作用 | 第54-56页 |
| 3 讨论 | 第56-64页 |
| ·rhBikunin 表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·rhBikunin 在毕赤酵母中的表达 | 第58-59页 |
| ·影响rhBikunin 在P. pastoris 中表达水平的因素 | 第59-64页 |
| 第三章 rhBikunin 抑制肿瘤浸润和转移的研究 | 第64-88页 |
| 1 材料与方法 | 第65-73页 |
| ·主要仪器和器材 | 第65页 |
| ·细胞株和实验动物 | 第65页 |
| ·主要试剂及配制 | 第65-66页 |
| ·细胞培养 | 第66-67页 |
| ·肿瘤细胞体外增殖能力测定 | 第67页 |
| ·肿瘤细胞体外粘附能力测定 | 第67-68页 |
| ·肿瘤细胞体外迁移和浸润能力测定 | 第68-69页 |
| ·小鼠Lewis 肺癌在C578L/6 小鼠体内的转移试验 | 第69页 |
| ·rhBikunin 对肿瘤细胞或组织uPA 表达的影响 | 第69-72页 |
| ·统计学方法 | 第72-73页 |
| 2 结果 | 第73-84页 |
| ·rhBikunin 对H08910 PM 细胞体外增殖能力的影响 | 第73-75页 |
| ·rhBikunin 对H08910 PM 细胞体外粘附能力的影响 | 第75-76页 |
| ·rhBikunin 对H08910 PM 细胞体外迁移能力的影响 | 第76-77页 |
| ·rhBikunin 对H08910 PM 细胞体外浸润能力的影响 | 第77-78页 |
| ·rhBikunin 对荷瘤小鼠体内肿瘤浸润转移的抑制作用 | 第78-82页 |
| ·rhBikunin 对肿瘤细胞或组织uPA 表达的影响 | 第82-84页 |
| 3 讨论 | 第84-88页 |
| ·rhBikunin 对H08910 PM 细胞体外浸润和转移的抑制作用 | 第85-86页 |
| ·rhBikunin 对C578L/6 荷瘤小鼠体内肿瘤浸润和转移的抑制作用 | 第86页 |
| ·rhBikunin 对肿瘤细胞uPA 表达的影响 | 第86-88页 |
| 研究总结 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 攻博期间发表的学术论文及其他成果 | 第100-101页 |
| 附录一 重组表达载体pPICZαC-bik 序列分析结果 | 第101-102页 |
| 附录二 rhBikunin Mono S 阳离子交换层析分离图谱 | 第102-103页 |
| 附录三 H08910 PM 细胞在Matrigel 中的浸润和迁移 | 第103-104页 |
| 附录四 Lewis 肺癌皮下移植瘤小鼠模型 | 第104-105页 |
| 附录五 小鼠Lewis 肺癌原发瘤组织 | 第105-106页 |
| 中文摘要 | 第106-110页 |
| Abstract | 第110-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
