| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 涡虫概况简介 | 第12页 |
| 2 涡虫神经系统的一般形态及研究 | 第12-14页 |
| 3 涡虫再生的相关研究 | 第14-17页 |
| ·涡虫的再生 | 第14页 |
| ·涡虫再生极性研究 | 第14-15页 |
| ·涡虫再生过程中细胞的参与 | 第15-16页 |
| ·涡虫神经系统的再生研究 | 第16-17页 |
| 4 涡虫 cDNA 文库和 EST 的研究概况 | 第17-20页 |
| ·cDNA 文库概述 | 第17页 |
| ·EST 概述 | 第17-18页 |
| ·涡虫 cDNA 文库的研究 | 第18-20页 |
| 5 原位杂交技术概述 | 第20-22页 |
| 第二章 多肠目涡虫神经系统 cDNA 文库的构建及 EST 初步分析 | 第22-38页 |
| 1 实验材料 | 第22-23页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·质粒和菌株 | 第22页 |
| ·引物 | 第22页 |
| ·化学试剂 | 第22-23页 |
| ·试剂的配制 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-31页 |
| ·总 RNA 的制备 | 第23-24页 |
| ·Trizol 法提取总 RNA | 第23-24页 |
| ·总 RNA 的检测 | 第24页 |
| ·mRNA 的分离纯化 | 第24-26页 |
| ·双链 cDNA 的合成 | 第26-27页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第26页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第26-27页 |
| ·双链 cDNA 的平末端处理 | 第27页 |
| ·双链 cDNA 的 XhoⅠ酶切 | 第27-28页 |
| ·载体的制备 | 第28-29页 |
| ·质粒 pBSK 的转化 | 第28页 |
| ·质粒 pBSK 的提取 | 第28页 |
| ·质粒 pBSK 的双酶切 | 第28页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第28-29页 |
| ·双链 cDNA 与载体的连接及转化 | 第29-30页 |
| ·双链 cDNA 与载体的连接 | 第29页 |
| ·热激法转化大肠杆菌 | 第29-30页 |
| ·cDNA 文库的鉴定 | 第30页 |
| ·cDNA 文库的库容量的测定 | 第30页 |
| ·cDNA 文库重组率及插入片段大小的测定 | 第30页 |
| ·部分克隆的 EST 测序 | 第30-31页 |
| ·部分克隆序列的测定 | 第30-31页 |
| ·测序结果的处理 | 第31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-36页 |
| ·总 RNA 的提取与鉴定 | 第31-32页 |
| ·RNA 的浓度、纯度检测 | 第31页 |
| ·RNA 的完整性检测 | 第31-32页 |
| ·mRNA 的分离纯化 | 第32页 |
| ·双链 cDNA 的合成 | 第32页 |
| ·双链 cDNA 的处理 | 第32页 |
| ·载体的制备 | 第32-33页 |
| ·cDNA 文库质量的鉴定 | 第33-34页 |
| ·测序结果的 EST 初步分析 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| ·提取组织总 RNA 的质量 | 第36页 |
| ·cDNA 文库的质量 | 第36页 |
| ·EST 初步分析 | 第36-38页 |
| 第三章 多肠目涡虫部分特异基因的原位杂交组织化学研究 | 第38-50页 |
| 1 实验材料 | 第38-40页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·化学试剂 | 第38页 |
| ·试剂的配制 | 第38-40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-43页 |
| ·探针的制备及检测 | 第40页 |
| ·石蜡切片的制备 | 第40-41页 |
| ·载玻片的处理 | 第40-41页 |
| ·制备石蜡切片 | 第41页 |
| ·组织切片原位杂交检测 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-45页 |
| ·质粒提取质量的检测 | 第43页 |
| ·探针合成质量的检测 | 第43-44页 |
| ·组织原位杂交结果与分析 | 第44-45页 |
| ·Nh-AE-D7 的组织原位杂交检测结果 | 第44页 |
| ·Nh-AE-F5 的组织原位杂交检测结果 | 第44页 |
| ·Nh-AF-A7 的组织原位杂交检测结果 | 第44-45页 |
| ·Nh-AF-E12 的组织原位杂交检测结果 | 第45页 |
| ·Nh-AG-C3 的组织原位杂交检测结果 | 第45页 |
| ·Nh-AG-C4 的组织原位杂交检测结果 | 第45页 |
| ·Nh-AG-C6 的组织原位杂交检测结果 | 第45页 |
| ·Nh-AG-E4 的组织原位杂交检测结果 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-50页 |
| ·组织原位杂交实验成败的影响因素 | 第45-47页 |
| ·石蜡切片过程中注意事项 | 第45-46页 |
| ·防止组织材料脱片的措施 | 第46页 |
| ·固定液及对杂交结果的影响 | 第46页 |
| ·影响探针杂交的因素 | 第46-47页 |
| ·涡虫特异基因的原位杂交组织化学研究 | 第47-50页 |
| 第四章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 图版 | 第60-70页 |
| 质粒图谱 | 第70-71页 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 | 第71页 |