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嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilium)热稳定性β-1,3-葡聚糖酶的纯化特性及cDNA克隆

中文摘要第1-13页
Abstract第13-15页
第一章 前言第15-31页
 1 文献综述第15-30页
   ·β-1,3-葡聚糖酶概述第15-16页
   ·β-1,3-葡聚糖酶的来源第16-17页
   ·β-1,3-葡聚糖酶的生理功能第17-18页
   ·β-1,3-葡聚糖酶的生物学以及分子生物学研究第18-25页
     ·植物β-1,3-葡聚糖酶第18-21页
     ·微生物β-1,3-葡聚糖酶第21-25页
     ·无脊椎动物β-1,3-葡聚糖酶第25页
   ·β-1,3-葡聚糖酶的应用第25-28页
     ·在饲料工业中的应用第25-26页
     ·在啤酒酿造业中的应用第26-27页
     ·食品添加剂第27页
     ·在医学中的应用第27-28页
     ·制备酵母β-1,3-葡聚糖第28页
     ·抗真菌第28页
   ·展望第28-30页
 2 选题的目的意义、研究内容、技术路线第30-31页
   ·选题的目的意义第30页
   ·研究内容第30页
   ·技术路线第30-31页
第二章 嗜热毛壳菌热稳定性Β-1,3-葡聚糖酶的纯化及特性第31-53页
 1 引言第31-32页
 2 材料与方法第32-37页
   ·实验材料第32-33页
     ·供试菌株第32页
     ·培养基第32页
     ·主要仪器和试剂第32-33页
   ·实验方法第33-37页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶酶活力测定第33页
     ·培养时间对嗜热毛壳菌产β-1,3-葡聚糖酶的影响第33页
     ·嗜热毛壳菌产β-1,3-葡聚糖酶的培养第33页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化第33-35页
     ·SDS-PAGE 对纯化得嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶的纯度鉴定及测定其纯化分子量第35页
     ·高效液相色谱法测定嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶酶解产物第35页
     ·蛋白质含量测定第35页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶酶学特性的研究第35-36页
     ·纯化得嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶蛋白N-端氨基酸序列测定第36-37页
 3 结果与分析第37-48页
   ·不同培养时间对嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶活性的影响第37页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化第37-43页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶粗酶液Phenyl-Sepharose 疏水柱层析第37-38页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶粗酶液DEAE-Sepharose 阴离子交换柱层析第38-39页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶粗酶液Sephacryl S-100 凝胶柱层析第39-40页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶纯化过程总表第40-41页
     ·各层析处理后嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶蛋白纯度的鉴定第41页
     ·纯化得嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶蛋白分子量的鉴定第41-43页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶的特性研究第43-47页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶最适反应温度第43-44页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶最适反应pH第44页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶的热稳定性第44-45页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶的pH 稳定性第45-46页
     ·不同金属离子对嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶活性的影响第46页
     ·高效液相色谱法测定嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶的降解作用方式第46-47页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶酶蛋白N-端氨基酸序列测定第47-48页
 4 讨论第48-53页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶的特性第48-49页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶的纯化方法第49-50页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶降解作用的方式第50页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶的稳定性第50-51页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶活性与金属离子的关系第51页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶活性与其疏水性的关系第51页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶的应用潜力和存在的问题第51-53页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶在生物防治方面的应用前景第52页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶工业化大规模生产、利用需解决的问题第52-53页
第三章 嗜热毛壳菌热稳定性Β-1,3-葡聚糖酶基因的CDNA 克隆及其序列分析第53-79页
 1 引言第53页
 2 材料和方法第53-61页
   ·材料第53-55页
     ·供试菌株第53-54页
     ·质粒第54页
     ·酶和生化试剂第54页
     ·仪器第54页
     ·培养基第54页
     ·溶液配制第54-55页
     ·PCR 引物第55页
   ·实验方法第55-61页
     ·产β-1,3-葡聚糖酶菌丝的诱导培养第55页
     ·总 RNA 的提取(Trizol 法)第55-56页
     ·紫外检测 RNA 产率和纯度第56页
     ·反转录cDNA 第一链的合成第56页
     ·目的基因cDNA 的分离第56-61页
     ·序列的生物信息学分析第61页
 3 结果与分析第61-76页
   ·嗜热毛壳菌总RNA 的提取第61页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶cDNA 的克隆第61-63页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-I和glu-N的核苷酸序列及其编码氨基酸的序列第63-65页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-I的核苷酸序列及推测的相应氨基酸序列第63-64页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-N的核苷酸序列及推测的相应氨基酸序列第64-65页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-I 和glu-N编码氨基酸序列的同源性比较第65-68页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-I 编码氨基酸密码子偏爱性分析第68-69页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-I 编码氨基酸的序列分析第69-73页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-I 编码氨基酸的组成第69-72页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-I 编码氨基酸的结构预测第72-73页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-N 编码氨基酸密码子偏爱性分析第73-74页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-N 编码的氨基酸序列分析第74-76页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-N 编码氨基酸组成第74-76页
     ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因glu-N 编码氨基酸的结构预测第76页
 4 讨论第76-79页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因及其编码氨基酸分析第76-77页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶cDNA 的克隆第77-78页
   ·嗜热毛壳菌β-1,3-葡聚糖酶基因的研究第78-79页
第四章 主要研究结论及后续研究建议第79-80页
 1 本研究获得的主要结论第79页
 2 对后续研究工作的建议第79-80页
参考文献第80-107页
致谢第107-108页
ACKNOWLEDGEMENT第108-110页
攻读学位期间发表论文情况第110页

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