| 本论文的创新性研究工作 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第12-21页 |
| 第一章 病毒TK的研究进展 | 第12-21页 |
| 1.鸭瘟概况 | 第12-14页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·病原 | 第12-13页 |
| ·流行病学 | 第13页 |
| ·临床症状 | 第13页 |
| ·DPV的分离与鉴定 | 第13-14页 |
| 2.TK基因研究 | 第14-18页 |
| ·TK基因的特点 | 第14-15页 |
| ·TK基因的表达调控 | 第15-16页 |
| ·TK酶生化特性 | 第16页 |
| ·TK基因及其编码蛋白的功能域 | 第16-17页 |
| ·关于TK基因工程疫苗 | 第17-18页 |
| 3.免疫组化技术 | 第18-20页 |
| 4.选题目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二部分 试验研究 | 第21-93页 |
| 第二章 鸭瘟病毒TK基因分子特性的分析 | 第21-31页 |
| 1.材料与方法 | 第21-23页 |
| ·材料 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-23页 |
| 2.结果 | 第23-27页 |
| ·DNA序列的测定与分析 | 第23页 |
| ·DPV TK基因及TK生物信息学分析 | 第23-27页 |
| 3.讨论 | 第27-31页 |
| ·关于生物信息学及新基因的发现 | 第27页 |
| ·序列的生物信息学分析 | 第27-29页 |
| ·TK蛋白结构与功能分析 | 第29-31页 |
| 第三章 鸭瘟病毒TK基因克隆、表达及多克隆抗体的制备 | 第31-56页 |
| 1.材料 | 第31-35页 |
| ·菌株/毒株/载体/疫苗 | 第31页 |
| ·试验动物 | 第31页 |
| ·主要工具酶及试剂 | 第31-32页 |
| ·主要溶液的配制(按照参考文献进行) | 第32-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·其它 | 第34-35页 |
| 2.试验方法 | 第35-46页 |
| ·DPV基因组DNA提取 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增鸭瘟病毒CHv株TK基因 | 第36页 |
| ·TK基因的T-载体克隆与鉴定 | 第36-39页 |
| ·TK基因重组表达菌株的构建 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及表达条件的优化 | 第40-43页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第43页 |
| ·兔高免血清的制备 | 第43-45页 |
| ·ELISA方法检测兔抗DPV TK抗体效价 | 第45-46页 |
| 3.结果 | 第46-53页 |
| ·鸭瘟病毒TK基因的扩增、克隆与鉴定 | 第46页 |
| ·重组表达质粒pET-32-TK的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组表达菌株的构建 | 第47页 |
| ·重组质粒的诱导表达及表达条件优化 | 第47-49页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| ·免疫兔血清的Western-blotting检测 | 第50-51页 |
| ·兔抗DPV TK血清ELISA效价的检测 | 第51-52页 |
| ·兔抗DPV TK IgG的纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第52-53页 |
| 4.讨论 | 第53-56页 |
| ·TK基因的克隆 | 第53页 |
| ·表达载体的选择 | 第53-54页 |
| ·诱导条件的优化 | 第54页 |
| ·包涵体的形成 | 第54-55页 |
| ·抗血清的制备 | 第55-56页 |
| 第四章 免疫荧光方法检测DPV强毒TK在人工感染鸭组织定位分布 | 第56-76页 |
| 1.材料 | 第56-57页 |
| ·毒株/试验动物 | 第56页 |
| ·主要试剂及配制 | 第56-57页 |
| ·主要仪器设备 | 第57页 |
| 2.方法 | 第57-61页 |
| ·动物感染试验 | 第57-58页 |
| ·组织包埋及切片 | 第58页 |
| ·间接免疫荧光法检测石蜡切片中DPV TK基因产物组织定位方法的建立与优化 | 第58-61页 |
| 3.结果 | 第61-72页 |
| ·免疫荧光法检测石蜡切片中DPV TK基因产物组织定位条件的优化结果 | 第61页 |
| ·免疫荧光法各因素随机组合优化结果 | 第61-62页 |
| ·特异性试验 | 第62页 |
| ·间接免疫荧光检测石蜡切片中DPV TK在人工感染鸭体内的表达规律 | 第62-63页 |
| ·间接免疫荧光检测石蜡切片中DPV TK基因产物在鸭体内的组织定位分布 | 第63-72页 |
| 4.讨论 | 第72-76页 |
| ·抗原包被与暴露 | 第72页 |
| ·荧光强度的影响因素 | 第72-73页 |
| ·抗体稀释度、孵育温度及时间的优化 | 第73-74页 |
| ·免疫荧光方法检测DPV TK基因表达产物组织分布及其功能分析 | 第74-76页 |
| 第五章 免疫酶组织化学法检测DPV强毒TK在人工感染鸭组织定位分布 | 第76-93页 |
| 1.材料 | 第76页 |
| ·毒株/试验动物 | 第76页 |
| ·主要试剂及配制 | 第76页 |
| ·主要仪器设备 | 第76页 |
| 2.方法 | 第76-79页 |
| ·动物感染试验 | 第76-77页 |
| ·组织包埋及切片 | 第77页 |
| ·免疫酶组织化学法检测石蜡切片中DPV TK基因产物组织定位方法的建立与优化 | 第77-79页 |
| 3.结果 | 第79-90页 |
| ·免疫酶组织化学法检测石蜡切片中DPV TK基因产物组织定位条件的优化 | 第79-80页 |
| ·经过免疫酶组织化学法个因素随机组合优化结果 | 第80页 |
| ·特异性试验 | 第80-81页 |
| ·免疫酶组织化学法检测石蜡切片中DPV TK在人工感染鸭体内的表达规律 | 第81-83页 |
| ·免疫酶组织化学法检测石蜡切片中DPV TK基因产物在鸭体内的组织定位分布 | 第83-90页 |
| 4.讨论 | 第90-93页 |
| ·间接免疫酶组织化学法建立与优化 | 第90-91页 |
| ·免疫酶组织化学法检测DPV TK基因表达产物分布规律研究 | 第91-92页 |
| ·DPV TK基因表达产物在鸭体内分布规律与病毒特性、TK基因功能的关系 | 第92-93页 |
| 第三部分 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简介 | 第104页 |
| 攻读硕士学位期间以第一作者身份发表的论文 | 第104页 |
