| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-19页 |
| 缩略语及其英(拉)汉对照 | 第19-23页 |
| 上篇 文献综述 | 第23-69页 |
| 第一章 棉花抗黄、枯萎病品种(材料)研究现状 | 第23-37页 |
| 1 棉花及其主要病害 | 第23-25页 |
| ·棉花 | 第23页 |
| ·棉花主要病害及其危害损失 | 第23-25页 |
| 2 棉花黄、枯萎病病原及症状识别 | 第25-29页 |
| ·棉花黄萎病 | 第25-27页 |
| ·棉花枯萎病 | 第27-29页 |
| ·枯萎病和黄萎病的主要区别 | 第29页 |
| 3 棉花黄、枯萎病致病机制 | 第29-30页 |
| ·棉花枯萎病致病机制 | 第29-30页 |
| ·棉花黄萎病致病机制 | 第30页 |
| 4 棉花黄、枯萎病抗病育种进展 | 第30-31页 |
| 5 棉花黄、枯萎病抗病性鉴定 | 第31-36页 |
| ·国内外现有的抗性鉴定方法 | 第32-33页 |
| ·病害诱发环境 | 第33页 |
| ·棉花黄、枯萎病分级标准 | 第33-34页 |
| ·棉花品种(材料)抗黄、枯萎病鉴定标准 | 第34页 |
| ·抗性鉴定相关数值的计算与校正 | 第34-36页 |
| 6 棉花黄、枯萎病抗性遗传研究进展 | 第36-37页 |
| 第二章 植物病原细菌HRP基因及其编码的HARPIN蛋白 | 第37-47页 |
| 1 植物病原细菌的hrp基因编码的harpin蛋白 | 第37-39页 |
| 2 Harpin引发的防卫机制 | 第39-41页 |
| 3 Harpin泌出系统及其在植物中的作用位点 | 第41-43页 |
| 4 Xanthomonas中的harpin | 第43-44页 |
| 5 Harpin蛋白结构 | 第44-45页 |
| 6 信号肽 | 第45-47页 |
| 第三章 转基因棉花 | 第47-61页 |
| 1 植物基因工程研究进展及应用 | 第47-49页 |
| 2 转基因棉花研究进展 | 第49-53页 |
| ·转基因棉花受体的选择 | 第49-51页 |
| ·转基因棉花研究概况 | 第51-53页 |
| 3 遗传转化方法 | 第53-60页 |
| ·农杆菌介导法 | 第54-59页 |
| ·花粉管通道法 | 第59页 |
| ·基因枪转化法 | 第59-60页 |
| 4 Harpin在转基因作物育种中的应用 | 第60-61页 |
| 第四章 基因芯片技术 | 第61-69页 |
| 1 生物芯片 | 第61-62页 |
| 2 芯片实验设计规则 | 第62-64页 |
| 3 生物芯片的应用 | 第64-68页 |
| ·生物芯片在植物学方面的应用 | 第64-66页 |
| ·生物芯片在微生物检测中的应用 | 第66-67页 |
| ·生物芯片在植物与病原菌互作中的应用 | 第67-68页 |
| 4 生物芯片常用的生物信息软件 | 第68-69页 |
| 下篇 研究报告 | 第69-223页 |
| 第五章 转HPA1_(Xoo)基因棉花选育及其抗病虫防卫反应 | 第69-138页 |
| 1 材料与方法 | 第72-98页 |
| ·植物材料 | 第72页 |
| ·载体 | 第72-73页 |
| ·供试菌株和昆虫 | 第73页 |
| ·主要培养基 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73-74页 |
| ·主要仪器(见附录4) | 第74页 |
| ·主要缓冲液 | 第74-76页 |
| ·质粒提取 | 第76页 |
| ·改良的农杆菌介导法 | 第76-78页 |
| ·棉花基因组DNA提取 | 第78-80页 |
| ·目的基因PCR扩增及验证 | 第80-84页 |
| ·PCR Southern Blot和Genomic Southern blot | 第84-87页 |
| ·Western Blot | 第87-88页 |
| ·RNA提取、反转录及RT-PCR | 第88-90页 |
| ·免疫胶体金定位 | 第90-91页 |
| ·转基因棉抗病性评价方法 | 第91-93页 |
| ·转基因棉花抗虫性评价方法 | 第93-94页 |
| ·转基因棉农艺性状调查 | 第94页 |
| ·悬浮细胞培养及其对棉花黄萎病菌的抗性测定 | 第94-95页 |
| ·微过敏检测 | 第95页 |
| ·转基因叶片H_2O_2的测定 | 第95-96页 |
| ·转基因叶片叶绿素测定 | 第96页 |
| ·防卫基因的相对表达水平的测定 | 第96-98页 |
| ·数据分析 | 第98页 |
| 2 结果 | 第98-132页 |
| ·农杆菌介导法转化棉花 | 第98-103页 |
| ·改良的农杆菌介导法转化棉花 | 第103-105页 |
| ·转基因棉花的选育过程 | 第105-106页 |
| ·转基因棉花的抗病性评价 | 第106-110页 |
| ·转基因棉花的抗虫性评价 | 第110-111页 |
| ·Harpin_(Xoo)激发了转hpa1_(Xoo)基因株系抗虫性 | 第111页 |
| ·转基因棉花的主要农艺性状 | 第111-118页 |
| ·转基因棉花染色体中hpa1_(Xoo)基因以多拷贝存在 | 第118-119页 |
| ·转基因棉花中Harpin_(Xoo)蛋白表达 | 第119-120页 |
| ·转基因棉花中hpa1_(Xoo)基因在转录水平的表达 | 第120页 |
| ·Harpin_(Xoo)在转基因棉花中的细胞定位 | 第120-122页 |
| ·Harpin_(Xoo)表达激发了转基因棉花在生物胁迫下产生氧爆发 | 第122-126页 |
| ·Harpin_(Xoo)表达激发了转基因棉花在生物胁迫下产生微过敏反应 | 第126-128页 |
| ·Harpin_(Xoo)表达增强了转基因棉花植保素编码基因dHG-OMT超表达 | 第128-129页 |
| ·Harpin_(Xoo)表达增强了与棉花黄萎病菌共培养中转基因植物细胞生存能力 | 第129-131页 |
| ·Harpin_(Xoo)提高了转基因棉T-34叶绿素含量 | 第131页 |
| ·转基因植株与受体植株的EF-1α序列存在异同 | 第131-132页 |
| 3 讨论 | 第132-137页 |
| ·转基因棉花后代的遗传分离 | 第132页 |
| ·转基因棉花具有多拷贝 | 第132-133页 |
| ·Harpin能影响植物的主要农艺性状 | 第133页 |
| ·Harpin能赋予植物多抗性 | 第133-134页 |
| ·不同的harpin在植物中可能具有不同的作用位点 | 第134页 |
| ·Harpin可能使植物处于一种引发态并能激发植物防卫反应 | 第134-136页 |
| ·不同harpin对植物体中防卫基因的调控能力存在一定差异 | 第136-137页 |
| 4 结论 | 第137-138页 |
| 第六章 转基因棉花全基因组转录谱分析 | 第138-174页 |
| 1 材料与方法 | 第141-143页 |
| ·植物材料 | 第141页 |
| ·植物组织RNA的提取 | 第141页 |
| ·对样品RNA进行荧光标记 | 第141-142页 |
| ·杂交与清洗 | 第142页 |
| ·芯片扫描 | 第142页 |
| ·芯片图像的采集与数据分析 | 第142页 |
| ·半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR分析 | 第142-143页 |
| ·病原菌接种 | 第143页 |
| 2 结果与讨论 | 第143-161页 |
| ·试验设计 | 第143-144页 |
| ·在叶部和根部分别获得了差异表达的530个cDNA和109个cDNA,涉及162个生化代谢途径 | 第144-146页 |
| ·T-34对Z35在细胞功能方面的基因表达 | 第146-152页 |
| ·Harpin_(Xoo)激发了防卫相关基因的表达 | 第152-157页 |
| ·生长素和乙烯相关基因的表达 | 第157-159页 |
| ·包含PRKs的LRR诱导 | 第159-160页 |
| ·Harpin_(Xoo)影响了ABA(abscisic acid)相关基因的表达 | 第160页 |
| ·转基因棉花植株中活性氧基因网络 | 第160-161页 |
| 3 结论 | 第161-174页 |
| 第七章 转基因棉花对棉铃虫全基因组转录谱的影响 | 第174-186页 |
| 1 材料与方法 | 第175-177页 |
| ·植物材料和供试棉铃虫 | 第175-176页 |
| ·饲喂转基因棉花叶片棉铃虫样的制备 | 第176页 |
| ·棉铃虫RNA的提取 | 第176页 |
| ·微阵列过程和数据处理 | 第176页 |
| ·差异表达基因的功能注释 | 第176页 |
| ·实时荧光定量PCR分析 | 第176-177页 |
| 2 结果 | 第177-183页 |
| ·芯片实验设计 | 第177-178页 |
| ·获得了872个差异表达基因 | 第178-179页 |
| ·差异表达基因涉及13种生物功能 | 第179-181页 |
| ·872个差异表达基因涉及到96个通路(pathway) | 第181-182页 |
| ·激活蛋白质水解相关基因和抑制合成相关基因 | 第182页 |
| ·铁离子可能参与破坏靶昆虫体内离子平衡 | 第182页 |
| ·编码细胞色素P450氧化酶的cDNA差异表达 | 第182-183页 |
| 3 讨论 | 第183-184页 |
| 4 结论 | 第184-186页 |
| 第八章 棉花角斑病菌HPAXM基因克隆及其蛋白二级结构分析 | 第186-223页 |
| 1 材料与方法 | 第189-200页 |
| ·供试细菌菌株、植物和培养条件 | 第189页 |
| ·载体 | 第189页 |
| ·主要试剂 | 第189-190页 |
| ·培养基 | 第190-191页 |
| ·缓冲液 | 第191-192页 |
| ·主要仪器(见附件4) | 第192页 |
| ·DNA提取和hpaXm克隆 | 第192页 |
| ·HpaXm融合表达载体的构建 | 第192页 |
| ·GST-hpaXm融合蛋白表达的影响因素 | 第192-193页 |
| ·HpaXm蛋白的制备 | 第193-195页 |
| ·HpaXm蛋白对TMV侵染的控制效果测定 | 第195页 |
| ·实时荧光定量PCR测定防卫基因的相对表达量 | 第195-196页 |
| ·使用TAIL-PCR进行hpaXm在Xcm基因组DNA上的定位 | 第196-197页 |
| ·HpaXm蛋白二级结构、信号肽及其转膜域预测 | 第197-198页 |
| ·HpaXm蛋白信号肽(signalP)的诱捕 | 第198-200页 |
| ·HpaXm全长和其部分片段以及这些片段定点突变后的多肽的生物活性测定 | 第200页 |
| 2 结果 | 第200-220页 |
| ·HpaXm基因及其编码蛋白的特性 | 第200-201页 |
| ·HpaXm在X. citri subsp.malvacearum基因组DNA中的定位 | 第201-207页 |
| ·HpaXm蛋白二级结构 | 第207页 |
| ·Coiled-coil及亮氨酸拉链预测 | 第207-209页 |
| ·HpaXm全长及其部分片段以及该片段定点突变后的多肽具有不同的生物活性 | 第209页 |
| ·HpaXm可能具有潜在的信号肽 | 第209-212页 |
| ·HpaXm密码子的偏倚 | 第212-215页 |
| ·HpaXm能增强烟草对TMV抗病性和诱导相关防卫基因的表达 | 第215-220页 |
| 3 讨论 | 第220-223页 |
| ·Xanthomonas harpin蛋白的进化关系 | 第220页 |
| ·HpaXm泌出涉及sec-dependent pathway | 第220-221页 |
| ·HpaXm是一个跨膜蛋白 | 第221页 |
| ·两个heptads具有调控HR的能力 | 第221-223页 |
| 全文总结 | 第223-225页 |
| 参考文献 | 第225-247页 |
| 附录 | 第247-261页 |
| 附录1 本论文涉及质粒的图谱及特性 | 第247-249页 |
| 附录2 主要参考网站 | 第249-250页 |
| 附录3 登陆NCBI的序列 | 第250-251页 |
| 附录4 主要仪器设备 | 第251-252页 |
| 附录5 转基因棉T-33全基因组转录谱分析 | 第252-259页 |
| 1 材料与方法 | 第253-255页 |
| ·植物材料 | 第253页 |
| ·组织块和细胞RNA的提取 | 第253页 |
| ·对样品RNA进行荧光标记 | 第253-254页 |
| ·杂交与清洗 | 第254页 |
| ·芯片扫描 | 第254页 |
| ·芯片图像的采集与数据分析 | 第254页 |
| ·实时荧光PCR(Real Time PCR)分析 | 第254-255页 |
| 2 结果与讨论 | 第255-259页 |
| ·试验设计 | 第255-256页 |
| ·在叶部和根部分别获得了454个差异表达的cDNA和15个cDNA | 第256页 |
| ·T-33与T-34在转录谱上的差异 | 第256-259页 |
| 附录6 不同转编码HARPIN蛋白基因植物中防卫基因表达比较 | 第259-261页 |
| 攻读博士学位期间发表及待发表的论文 | 第261-263页 |
| 致谢 | 第263页 |
