| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| ·多不饱和脂肪酸的研究概况 | 第11-14页 |
| ·多不饱和脂肪酸的分类及命名 | 第11页 |
| ·多不饱和脂肪酸的主要来源 | 第11-12页 |
| ·多不饱和脂肪酸的生理功能 | 第12-13页 |
| ·多不饱和脂肪酸的研究进展 | 第13-14页 |
| ·脂肪酸去饱和酶的研究概况 | 第14-18页 |
| ·去饱和酶的分类、命名及分布 | 第14-15页 |
| ·去饱和酶催化合成不饱和脂肪酸的途径 | 第15-16页 |
| ·去饱和酶的研究进展 | 第16-18页 |
| ·酵母表达系统 | 第18-22页 |
| ·酵母表达系统的优缺点 | 第18页 |
| ·酵母rDNA 单元简介 | 第18-20页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第20页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第20-22页 |
| ·外源基因在酵母中表达时的影响因素 | 第22页 |
| ·染色体步移技术 | 第22-23页 |
| ·本项研究目标和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 油脂酵母生理生化特性鉴定 | 第24-38页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·实验菌株 | 第24-25页 |
| ·酶和试剂 | 第25页 |
| ·主要缓冲液和溶液的配置 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·所需引物 | 第26页 |
| ·供试质粒 | 第26页 |
| ·仪器和设备 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-31页 |
| ·菌种活化与保藏 | 第27页 |
| ·酵母形态观察实验 | 第27-28页 |
| ·酵母抗性筛选 | 第28页 |
| ·酵母rDNA 的克隆 | 第28-31页 |
| ·供试酵母的脂肪酸组分分析测定 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-38页 |
| ·菌种活化与保藏 | 第31页 |
| ·酵母形态鉴定结果与分析 | 第31-33页 |
| ·抗性选择筛选结果 | 第33-34页 |
| ·酵母rDNA 序列的扩增 | 第34-37页 |
| ·供试酵母脂肪酸成分测定结果 | 第37-38页 |
| 第三章 △~6-脂肪酸去饱和酶基因在酵母中的表达 | 第38-54页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·酶和试剂 | 第38页 |
| ·目的基因 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38-39页 |
| ·供试缓冲液 | 第39页 |
| ·所需引物 | 第39页 |
| ·供试菌株和质粒 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞的制备、转化和诱导表达 | 第40-41页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备、转化和诱导表达 | 第41-42页 |
| ·毕赤酵母△~6-脂肪酸去饱和酶基因表达载体的构建及转化 | 第42-43页 |
| ·酿酒酵母△~6-脂肪酸去饱和酶基因表达载体的构建及转化 | 第43页 |
| ·转化子稳定性检测 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-54页 |
| ·△~6-脂肪酸去饱和酶基因毕赤酵母表达载体的构建及表达 | 第43-48页 |
| ·△~6-脂肪酸去饱和酶基因酿酒酵母表达载体的构建及转化 | 第48-53页 |
| ·整合型表达载体和附加体型表达载体的稳定性比较 | 第53-54页 |
| 第四章 橘林油脂酵母转化系统的建立 | 第54-62页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·菌株和质粒 | 第54-55页 |
| ·目的基因 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·常用缓冲液 | 第55页 |
| ·所需引物 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·rDNA 酶切位点引入 | 第55-56页 |
| ·启动子和终止子的扩增 | 第56页 |
| ·潮霉素抗性基因的扩增及其表达单元的构建 | 第56页 |
| ·绿色荧光蛋白标记基因的扩增及其表达单元的构建 | 第56页 |
| ·表达载体pLK-rhPHG 的组装 | 第56-57页 |
| ·橘林油脂酵母的转化 | 第57页 |
| ·绿色荧光蛋白鉴定方法 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-62页 |
| ·橘林油脂酵母载体构建过程分析 | 第57-59页 |
| ·表达载体pLK-rhPHG 的功能验证 | 第59-62页 |
| 第五章 丝孢酵母转化系统的建立 | 第62-77页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·实验材料 | 第62-64页 |
| ·酶和试剂 | 第62页 |
| ·培养基 | 第62页 |
| ·所需引物 | 第62-63页 |
| ·菌株和质粒 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-67页 |
| ·酵母总DNA 的提取 | 第64页 |
| ·简并引物克隆PGK 基因部分基因组DNA 序列 | 第64页 |
| ·染色体步移法扩增21148 磷酸甘油酯激酶PGK 基因的启动子序列 | 第64-65页 |
| ·丝孢酵母表达载体的构建 | 第65-67页 |
| ·发酵性丝孢酵母表达载体的转化和表达 | 第67页 |
| ·实验结果与分析 | 第67-77页 |
| ·磷酸甘油酯激酶蛋白质比对结果分析 | 第67-70页 |
| ·丝孢酵母磷酸甘油酯激酶部分cDNA 序列的克隆 | 第70-71页 |
| ·克隆得到的PGK 基因及其启动子的序列分析 | 第71-72页 |
| ·丝孢酵母表达载体的构建过程分析 | 第72-73页 |
| ·表达载体pTF-rPHG 的功能验证 | 第73-77页 |
| 第六章 实验总结 | 第77-79页 |
| 创新点 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 附录 | 第86-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 作者简历 | 第91页 |
