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RNAi技术沉默玉米支链淀粉合成相关基因表达的研究

中文摘要第1-6页
Abstract第6-13页
第1章 文献综述第13-29页
   ·影响玉米淀粉生物合成的关键酶第15-19页
     ·腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶第17页
     ·淀粉合成酶第17页
     ·淀粉分支酶第17-18页
     ·淀粉去分支酶第18-19页
   ·RNA 干扰技术第19-23页
     ·RNAi 的发现第19-20页
     ·RNAi 的种类第20-22页
     ·RNAi 作用机理第22-23页
   ·RNA 干扰的作用特点第23-24页
   ·RNA 干扰的研究进展第24页
   ·玉米遗传转化系统的研究进展第24-25页
     ·愈伤组织诱导第24-25页
     ·分化第25页
   ·植物转基因方法概况第25-27页
     ·农杆菌介导法第26页
     ·基因枪法第26页
     ·花粉管通道法第26-27页
     ·显微注射法(子房注射法)第27页
     ·其他转化方法第27页
   ·本研究的目的和意义第27-29页
第2章 支链淀粉合成相关基因 RNAi 载体构建第29-68页
   ·材料与方法第29-35页
     ·实验材料第29页
     ·菌株与载体第29-31页
     ·试剂第31-32页
     ·实验所需试剂及培养基的配制第32页
     ·仪器第32-33页
     ·植物材料第33页
     ·玉米基因组 DNA 的提取第33-34页
     ·玉米总 RNA 的提取第34页
     ·cDNA 第一链的合成第34-35页
   ·实验方法第35-49页
     ·植物表达载体的构建第35-36页
     ·合成支链淀粉的相关基因的克隆第36-38页
     ·合成支链淀粉相关基因的 PCR 扩增第38-41页
     ·琼脂糖凝胶电泳回收目的基因片段第41-42页
     ·回收产物的平末端加 A第42页
     ·目的基因片段与 T 载体连接第42-43页
     ·大肠杆菌 Top10 感受态细胞的制备(CaCl2法)第43页
     ·转化大肠杆菌感受态细胞第43-44页
     ·质粒 DNA 的提取第44-45页
     ·重组质粒的 PCR 鉴定第45页
     ·重组质粒的酶切鉴定第45-46页
     ·测序第46页
     ·目的基因片段与中间载体的连接第46-48页
     ·目的基因片段与表达载体 pCAMBIA3301 的连接第48-49页
   ·结果与分析第49-66页
     ·玉米 DNA 的提取第49-50页
     ·幼胚总 RNA 的提取第50-51页
     ·cDNA 第一链的合成第51页
     ·合成支链淀粉相关基因的克隆第51-53页
     ·目的基因片段与克隆载体的连接及鉴定第53-56页
     ·目的基因片段与中间载体的连接及鉴定第56-60页
     ·目的基因片段与表达载体 pCAMBIA3301 的连接及鉴定第60-66页
   ·讨论第66-67页
   ·结论第67-68页
第3章 玉米遗传转化体系的建立及不同转基因方法的研究第68-105页
   ·实验材料第68页
     ·受体材料第68页
     ·菌株第68页
     ·实验仪器第68页
   ·实验方法第68-81页
     ·Southern blot 杂交液的配制第68-69页
     ·培养基的配置第69-71页
     ·愈伤组织的诱导第71页
     ·分化第71页
     ·生根第71页
     ·炼苗及移栽第71-72页
     ·农杆菌介导玉米不同组织部位的遗传转化第72-74页
     ·花粉管通道法介导玉米遗传转化第74-75页
     ·显微注射法介导的玉米遗传转化第75页
     ·转基因植株鉴定第75-80页
     ·转基因植株淀粉含量测定第80-81页
   ·结果与分析第81-101页
     ·玉米愈伤组织的诱导第81-83页
     ·愈伤组织的分化第83-85页
     ·生根第85页
     ·炼苗及移栽第85-86页
     ·农杆菌侵染愈伤组织第86-87页
     ·农杆菌侵染玉米幼胚第87-88页
     ·农杆菌侵染下胚轴第88-89页
     ·花粉管通道法第89-90页
     ·显微注射法第90页
     ·GUS 瞬时检测第90-94页
     ·转基因检测第94-98页
     ·T_0代转基因植株田间生物性状分析第98-100页
     ·T_1代转基因玉米籽粒形态分析第100页
     ·T_1代转基因植株淀粉含量的测定第100-101页
   ·讨论第101-104页
   ·结论第104-105页
全文结论第105-106页
参考文献第106-118页
硕士期间工作第118-119页
致谢第119页

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