奶牛X-，Y-精子抑制消减文库的构建
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 绪论 | 第9-20页 |
| ·几种常见的性控精液分离方法的研究现状 | 第9-11页 |
| ·流式细胞仪分离法 | 第9-10页 |
| ·沉降法 | 第10-11页 |
| ·自由流电泳法 | 第11页 |
| ·免疫学方法分离性控精液的研究现状 | 第11-13页 |
| ·免疫学方法分离性控精液的理论基础 | 第11-12页 |
| ·精子中mRNA 研究的进展 | 第12-13页 |
| ·免疫法分离性控精液的进展 | 第13页 |
| ·基因差异表达的研究方法 | 第13-20页 |
| ·差别筛选 | 第13-14页 |
| ·消减杂交 | 第14页 |
| ·差异显示技术 | 第14-15页 |
| ·RNA 任意引物PCR | 第15页 |
| ·代表性差示分析 | 第15-16页 |
| ·抑制消减杂交技术 | 第16-18页 |
| ·DNA 微阵列技术 | 第18-19页 |
| ·基因表达系列分析技术 | 第19-20页 |
| 2 精子总RNA 的提取 | 第20-26页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·主要酶类及试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·主要Marker | 第21页 |
| ·牛精液样品及组织样品来源 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-24页 |
| ·引物设计 | 第21-22页 |
| ·试剂的配制 | 第22-23页 |
| ·传统TRIzol 法提取牛组织RNA | 第23页 |
| ·精液样本计数 | 第23页 |
| ·牛精总RNA 提取 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-26页 |
| ·精子rna 提取结果 | 第24页 |
| ·精子总RNA 的定量结果 | 第24页 |
| ·精子总RNA 完整性和体细胞污染检测结果 | 第24-26页 |
| 3 抑制消减杂交 | 第26-33页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·主要酶类及试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-31页 |
| ·cDNA 第一链合成 | 第26页 |
| ·cDNA 扩增 | 第26-27页 |
| ·过柱纯化 | 第27-28页 |
| ·Rsa I 酶切处理 | 第28页 |
| ·Adaptor Ligation | 第28页 |
| ·接头连接效率检测 | 第28-29页 |
| ·第一轮杂交 | 第29页 |
| ·第二轮杂交 | 第29-30页 |
| ·第一轮PCR 扩增 | 第30页 |
| ·第二轮PCR 扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·LD PCR 优化图谱结果 | 第31-32页 |
| ·RsaI 酶切结果 | 第32页 |
| ·接头连接效率检测 | 第32-33页 |
| ·经过两轮杂交后二次PCR 效果检测 | 第33页 |
| 4 载体链接，单克隆检测及测序 | 第33-37页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·数据分析软件 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-36页 |
| ·T-载体连接及转化 | 第33-34页 |
| ·单克隆检测 | 第34页 |
| ·正、反文库测序 | 第34-36页 |
| ·数据分析 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-37页 |
| ·消减cDNA 文库构建及菌体PCR 检测结果 | 第36页 |
| ·消减文库的测序及分析结果 | 第36-37页 |
| 5 讨论与结论 | 第37-41页 |
| ·精子总RNA 提取相关讨论分析 | 第37-38页 |
| ·抑制消减杂交方法应用分析 | 第38-39页 |
| ·测序结果的分析 | 第39-40页 |
| ·结论 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 附录 | 第46-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
