| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-28页 |
| ·脂肪酶/酯酶 | 第12-15页 |
| ·脂肪酶/酯酶简介 | 第12-14页 |
| ·脂肪酶/酯酶分类 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶/酯酶应用 | 第15页 |
| ·酶分子定向进化 | 第15-17页 |
| ·筛选方法综述 | 第17-26页 |
| ·常规酶活性筛选方法 | 第17-18页 |
| ·高通量酶活性筛选方法 | 第18-26页 |
| ·遗传选择系统 | 第18-19页 |
| ·基于荧光激活细胞分选的酶活性筛选方法 | 第19-23页 |
| ·基于荧光激活微液滴分选的酶活性超高通量筛选方法 | 第23-26页 |
| ·立项依据 | 第26-28页 |
| 第2章 大肠杆菌脂肪酶/酯酶表面展示体系的建立 | 第28-42页 |
| ·引言 | 第28-29页 |
| ·材料方法 | 第29-35页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·质粒和菌种 | 第30页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·培养基、各种溶液 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·化学感受态制备 | 第31-32页 |
| ·化学转化方法 | 第32页 |
| ·PCR 方法 | 第32-34页 |
| ·用 CloneEZ 重组试剂盒进行 DNA 连接 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌细胞悬液的制备 | 第35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-40页 |
| ·质粒的构建 | 第35-37页 |
| ·目的片段的 PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·载体的 PCR 线性化 | 第36页 |
| ·CloneEZ 重组连接 | 第36-37页 |
| ·转化重组子的验证及工程菌的表达 | 第37-40页 |
| ·转化重组子的验证 | 第37-38页 |
| ·工程菌的表达及活性测定 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第40-42页 |
| 第3章 基于微液滴的酶微反应器制备条件探索 | 第42-58页 |
| ·引言 | 第42-43页 |
| ·材料方法 | 第43-46页 |
| ·主要仪器 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·质粒和菌种 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-46页 |
| ·玻片组装芯片的制作及改性方法 | 第44-45页 |
| ·膜挤出仪的使用方法 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-55页 |
| ·微液滴的制备 | 第46-50页 |
| ·玻片组装微流控芯片制备微液滴 | 第46-49页 |
| ·膜挤出法制备微液滴 | 第49-50页 |
| ·膜挤出法微液滴的流式细胞仪形态及稳定性表征 | 第50-53页 |
| ·膜挤出法微液滴中的酶反应 | 第53-55页 |
| ·小结 | 第55-58页 |
| ·微液滴制备及稳定性 | 第55-56页 |
| ·微液滴中的酶反应 | 第56-58页 |
| 第4章 微反应器的流式筛选条件优化 | 第58-78页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·材料方法 | 第58-60页 |
| ·主要仪器 | 第58-59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-75页 |
| ·不同内水相-油相比例对微反应器的形态影响 | 第60-62页 |
| ·微液滴中细胞包裹效率的优化 | 第62-67页 |
| ·底物选择及加入方式探讨 | 第67-69页 |
| ·微反应器中产物扩散速率 | 第69-71页 |
| ·内标的意义及稳定性 | 第71-72页 |
| ·反应时间优化 | 第72-74页 |
| ·模式筛选及富集效率评估 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75-78页 |
| 第5章 结论 | 第78-80页 |
| ·论文概括 | 第78页 |
| ·前景和展望 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-88页 |
| 附录 | 第88-90页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |