糖多孢红霉菌糖基转移酶突变体的构建及其产物鉴定
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-18页 |
| ·红霉素类药物简介 | 第12-13页 |
| ·红霉素类药物基因工程研究进展 | 第13-15页 |
| ·糖基转移酶在合成新型抗生素中的应用 | 第15-16页 |
| ·糖多孢红霉菌中的糖基转移酶 | 第16-17页 |
| ·本论文研究内容及意义 | 第17-18页 |
| 第二章 糖基转移酶突变体的构建 | 第18-39页 |
| ·引言 | 第18页 |
| ·材料 | 第18-24页 |
| ·质粒及菌种 | 第18-19页 |
| ·培养基配方及用途 | 第19-20页 |
| ·主要试剂配方及功用 | 第20-22页 |
| ·购置的试剂及试剂盒 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-32页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的小量制备 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备、检测和转化 | 第24-25页 |
| ·DNA片段的PCR引物设计 | 第25-26页 |
| ·PCR反应体系及步骤 | 第26-27页 |
| ·DNA片段的琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| ·DNA片段的凝胶回收及纯化 | 第27-28页 |
| ·限制性双酶切体系 | 第28页 |
| ·DNA片段与质粒的连接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌的菌种保藏 | 第28页 |
| ·糖多孢红霉菌基因组DNA的小量制备 | 第28-29页 |
| ·糖多孢红霉菌基因组DNA的大量制备 | 第29-30页 |
| ·糖多孢红霉菌原生质体的制备和转化 | 第30-31页 |
| ·糖多孢红霉菌发酵产物的生物活性试验 | 第31页 |
| ·糖多孢红霉菌发酵产物的TLC分析 | 第31页 |
| ·糖多孢红霉菌菌种的保藏 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-38页 |
| ·同源重组载体的构建 | 第32-34页 |
| ·整合体的筛选 | 第34页 |
| ·整合体的鉴定 | 第34-36页 |
| ·糖多孢红霉菌突变体的筛选 | 第36-37页 |
| ·糖多孢红霉菌突变体的鉴定 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 突变体发酵产物的鉴定 | 第39-44页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·菌种 | 第39页 |
| ·培养基和试剂的配方 | 第39-40页 |
| ·购置的试剂及主要设备 | 第40页 |
| ·方法 | 第40页 |
| ·糖多孢红霉菌发酵产物TLC鉴定 | 第40页 |
| ·糖多孢红霉菌发酵产物MS分析 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-43页 |
| ·突变体发酵产物的TLC鉴定 | 第40-41页 |
| ·突变体发酵产物的MS分析 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 糖基转移酶在突变体中的活性检测 | 第44-53页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·质粒与菌种 | 第44-46页 |
| ·培养基及试剂的配方 | 第46页 |
| ·购置的试剂及试剂盒 | 第46页 |
| ·主要设备 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的小量制备 | 第46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备、检测和转化 | 第46页 |
| ·DNA片段的PCR引物设计 | 第46-47页 |
| ·PCR反应体系及步骤 | 第47页 |
| ·DNA片段的凝胶电泳、回收及纯化、酶切、连接 | 第47页 |
| ·糖多孢红霉菌基因组DNA的小量制备 | 第47页 |
| ·糖多孢红霉菌原生质体的制备和转化 | 第47页 |
| ·发酵产物的生物活性试验及TLC分析 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-52页 |
| ·整合型表达质粒的构建 | 第47-49页 |
| ·表达质粒在突变体中的活性检测 | 第49-52页 |
| ·讨论 | 第52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第五章 总结 | 第53-54页 |
| ·本研究主要结果 | 第53页 |
| ·本研究创新之处 | 第53页 |
| ·需进一步研究的问题 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 附录 | 第59-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第69-70页 |
