| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一部分 综述 | 第9-20页 |
| 1 拟南芥的优势及研究策略 | 第9-11页 |
| ·模式植物拟南芥 | 第9-10页 |
| ·拟南芥分子生物学研究策略 | 第10-11页 |
| 2 J 蛋白的研究与进展 | 第11-14页 |
| ·分子伴侣——热休克蛋白 | 第11-12页 |
| ·J 蛋白的结构与功能 | 第12-13页 |
| ·拟南芥中J 蛋白的研究 | 第13-14页 |
| 3 生物信息学方法研究蛋白的相互作用 | 第14-16页 |
| ·生物信息学的网络资源 | 第14-15页 |
| ·蛋白互作生物信息学的计算方法概述 | 第15-16页 |
| 4 基于酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)的蛋白互作研究 | 第16-20页 |
| ·酵母双杂交系统的原理与应用 | 第16-18页 |
| ·酵母双杂交系统的局限和进展 | 第18-20页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第20-35页 |
| 1 材料 | 第20-22页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌株与载体 | 第20页 |
| ·各种酶及试剂 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| 2 实验方法与步骤 | 第22-35页 |
| ·拟南芥的培养 | 第22页 |
| ·基因引物设计 | 第22页 |
| ·TriZol 一步法提取拟南芥总RNA | 第22-23页 |
| ·半定量 RT-PCR 方法 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第24-25页 |
| ·连接反应物对宿主感受态细胞的转化 | 第25页 |
| ·重组克隆的PCR 鉴定 | 第25页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第26页 |
| ·酶切质粒的连接 | 第26-27页 |
| ·酵母质粒的小量转化 | 第27页 |
| ·酵母质粒的提取 | 第27页 |
| ·诱饵蛋白自激活实验 | 第27-28页 |
| ·酵母蛋白的提取 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第28-29页 |
| ·Western bloting | 第29-30页 |
| ·cDNA 文库的构建 | 第30-32页 |
| ·使用CHROMA SPIN? TE-400 Column 纯化ds cDNA | 第32页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第32-33页 |
| ·酵母文库质粒的大量转化（pGADT7） | 第33页 |
| ·转化子的收获 | 第33-34页 |
| ·接合杂交 | 第34-35页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第35-50页 |
| 1 数据库分析预测ALP1 互作基因 | 第35-37页 |
| 2 pGBKT7-ALP1 载体的构建和检测 | 第37-40页 |
| ·目的片段的获得及重组质粒酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组诱饵质粒pGBKT7-ALP1 的毒性与自激活检测 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE 和Western blotting 验证AH109/pGBKT7-ALP1 蛋白的表达 | 第39-40页 |
| 3 pGADT7-X 载体的构建 | 第40-44页 |
| 4 pGBKT7- ALP1 与pGADT7-X 共转酵母AH109 检测蛋白互作 | 第44-45页 |
| 5 拟南芥cDNA 文库的构建 | 第45-48页 |
| ·拟南芥RNA 的提取与检测 | 第45页 |
| ·ds cDNA 的合成 | 第45-46页 |
| ·文库的构建及鉴定 | 第46-48页 |
| ·文库的转化效率 | 第46-47页 |
| ·文库的保存及滴度的测定 | 第47页 |
| ·文库多态性及重组比的鉴定 | 第47-48页 |
| 6 酵母Y187(pGADT7-library)与AH109(pGBKT7-ALP1) 菌株表达验证 | 第48-50页 |
| 第四部分 小结与讨论 | 第50-53页 |
| 下一步工作 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 附录1 本研究中所用的引物 | 第58-59页 |
| 附录2 主要试剂与缓冲液的配制 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
