| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 英文缩略语 | 第9-12页 |
| 第一部分 文献综述 昆虫抗冻蛋白的结构特性、作用和表达特性及天然抗冻蛋白的纯化 | 第12-22页 |
| 1. 昆虫抗冻蛋白的结构特性 | 第12-13页 |
| 2. 抗冻蛋白的功能特性 | 第13页 |
| 3. 抗冻蛋白的表达规律 | 第13-15页 |
| ·昆虫抗冻蛋白的季节性表达规律 | 第13-14页 |
| ·昆虫抗冻蛋白受环境胁迫时的表达规律 | 第14页 |
| ·发育阶段对昆虫抗冻蛋白表达的影响 | 第14页 |
| ·其它抗冻基因的表达规律 | 第14-15页 |
| 4. 天然抗冻蛋白的纯化 | 第15-16页 |
| 5. 昆虫抗冻蛋白的研究展望 | 第16-17页 |
| 参考文献 | 第17-22页 |
| 第二部分 实验内容 | 第22-70页 |
| 1 材料及试剂 | 第23-24页 |
| ·试验样本的采集及饲养 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| ·幼虫的饲养 | 第23-24页 |
| ·幼虫龄期的鉴定 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-30页 |
| ·PCR 引物的设计 | 第24页 |
| ·光滑鳖甲抗冻蛋白基因 Apafp752 PCR 引物设计 | 第24页 |
| ·光滑鳖甲抗冻蛋白基因 Apafp914 PCR 引物设计 | 第24页 |
| ·昆虫内标基因 β-actin 引物 | 第24页 |
| ·光滑鳖甲体液的提取 | 第24-25页 |
| ·光滑鳖甲总 RNA 的提取 | 第25页 |
| ·总 RNA 的基因组 DNA 消化 | 第25-26页 |
| ·PCR | 第26页 |
| ·反转录 PCR | 第26页 |
| ·Real-TimePCR | 第26-27页 |
| ·测序载体 pMD18-Apafp752 和 pMD18-Apafp914 的构建 | 第27-28页 |
| ·渗透浓度及 THA 的测定 | 第28页 |
| ·各种环境因素处理 | 第28-29页 |
| ·低温处理 | 第28页 |
| ·干旱处理 | 第28页 |
| ·温度变化处理 | 第28-29页 |
| ·幼虫各龄期 Apafp752 和 Apafp914 转录水平的变化 | 第29页 |
| ·不同发育阶段的光滑鳖甲幼虫在低温下存活率与 AFP 基因转录水平的变化规律 | 第29页 |
| ·蛋白定量 | 第29页 |
| ·天然抗冻蛋白的分离纯化 | 第29页 |
| ·数据处理 | 第29-30页 |
| ·数据分析 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-63页 |
| ·样本的采集 | 第30页 |
| ·光滑鳖甲的虫态 | 第30-31页 |
| ·昆虫 RNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·Apafp752,Apafp914 与 β-actin 的测序结果 | 第32-33页 |
| ·Real-time PCR 扩增效率的校正 | 第33-36页 |
| ·光滑鳖甲抗冻蛋白的季节性转录规律 | 第36-40页 |
| ·ApAFPs 在冷胁迫下的表达 | 第40-46页 |
| ·温度变化对 ApAFPs 转录和表达的影响 | 第46-49页 |
| ·ApAFPs 在干旱环境下的转录和表达 | 第49-52页 |
| ·光滑鳖甲幼虫各个发育阶段 Apafp752 和 Apafp914 转录水平的变化 | 第52-56页 |
| ·不同发育阶段的光滑鳖甲幼虫在低温下存活率与 AFP 基因转录水平的变化规律 | 第56-60页 |
| ·低温对幼虫和成虫 Apafps mRNA 水平影响的比较 | 第60页 |
| ·光滑鳖甲天然抗冻蛋白的分离及初步纯化 | 第60-63页 |
| ·阳离子交换 | 第60-62页 |
| ·蛋白定量 | 第62-63页 |
| ·渗透浓度的测定 | 第63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| ·光滑鳖甲抗冻蛋白基因的季节性转录规律 | 第64页 |
| ·环境因素对光滑鳖甲成虫抗冻蛋白基因表达的影响 | 第64-65页 |
| ·发育阶段与低温对光滑鳖甲幼虫抗冻蛋白基因表达的影响 | 第65页 |
| ·光滑鳖甲天然抗冻蛋白的分离与纯化 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第70-72页 |
| 第四部分 附录 | 第72-77页 |
| 附录1 常用试剂配制方法 | 第72-75页 |
| 附录2 常用仪器设备 | 第75-76页 |
| 附录3 个人简历 | 第76-77页 |
| 附录4 致谢 | 第77页 |
