| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| ·黄曲霉对人类健康造成巨大的威胁 | 第12-14页 |
| ·黄曲霉毒素的分类及理化性质 | 第12-13页 |
| ·黄曲霉毒素导致肝癌的流行病学证据 | 第13页 |
| ·黄曲霉毒素的致癌机理 | 第13-14页 |
| ·黄曲霉毒素的检测 | 第14-15页 |
| ·关于食品和饲料中黄曲霉毒素污染的法规和标准 | 第14-15页 |
| ·黄曲霉毒素 B_1的检测方法 | 第15页 |
| ·重组抗体是新一代的抗体制备技术 | 第15-18页 |
| ·抗体的制备技术 | 第16页 |
| ·重组抗体的发展 | 第16-17页 |
| ·Tomlinson I+J 人源单链抗体文库 | 第17-18页 |
| ·重组抗体的研究现状 | 第18-20页 |
| ·重组抗体的筛选 | 第18-19页 |
| ·重组抗体的表达 | 第19页 |
| ·重组抗体的建模 | 第19页 |
| ·重组抗体的改造 | 第19-20页 |
| ·立题意义及主要研究内容 | 第20-21页 |
| 参考文献 | 第21-27页 |
| 第二章 抗黄曲霉毒素B_1单链抗体的筛选 | 第27-44页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·材料与方法 | 第27-32页 |
| ·文库与菌株 | 第27页 |
| ·酶、试剂、培养基及其他实验材料 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·辅助噬菌体的大量制备 | 第28页 |
| ·文库的保存 | 第28-29页 |
| ·用酶标板筛选文库 | 第29-30页 |
| ·多克隆噬菌体ELISA 对文库筛选结果的鉴定 | 第30页 |
| ·单克隆噬菌体ELISA 对文库筛选结果的鉴定 | 第30页 |
| ·可溶性单链抗体的制备 | 第30-31页 |
| ·噬菌粒的提取 | 第31页 |
| ·目的基因的测序 | 第31页 |
| ·聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳联用（PCR-DGGE） | 第31-32页 |
| ·表面等离子共振法测定亲和力 | 第32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-41页 |
| ·洗脱方法对筛选效率的影响 | 第32-35页 |
| ·用半抗原 AFB_1直接包被用以筛选文库 | 第35-38页 |
| ·抗 AFB_1的抗体克隆的亲和力与交叉反应性 | 第38-40页 |
| ·游离 AFB_1与酶标板的结合 | 第40页 |
| ·scFV-H4 的蛋白序列 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 第三章 scFv-H4的在大肠杆菌中的表达 | 第44-56页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·材料与方法 | 第44-46页 |
| ·菌株，载体与培养基 | 第44页 |
| ·试剂与仪器 | 第44页 |
| ·质粒提取 | 第44页 |
| ·目的基因的聚合酶链式反应（PCR） | 第44-45页 |
| ·目的基因的酶切 | 第45页 |
| ·目的基因的回收 | 第45页 |
| ·H4 的克隆与转化 | 第45页 |
| ·scFv-H4 的诱导表达 | 第45页 |
| ·大肠杆菌各部分蛋白的提取及纯化 | 第45-46页 |
| ·十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第46页 |
| ·用Peterson 法测定蛋白质浓度 | 第46页 |
| ·酶联免疫吸附法（ELISA） | 第46页 |
| ·实验结果与讨论 | 第46-53页 |
| ·用不同的载体表达scFv-H4 的结果 | 第46-49页 |
| ·严谨的启动子有利于scFv-H4 的表达的影响 | 第49-50页 |
| ·E.coli BL21(DE3)/pET22b/H4 表达的 scFv-H4 的分布 | 第50-51页 |
| ·E.coli BL21(DE3)/pEt22b/H4 的表达条件的优化 | 第51-53页 |
| ·结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 第四章 scFv-H4的同源建模与分子改造 | 第56-78页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·材料与方法 | 第56-60页 |
| ·菌株、载体与培养基 | 第56页 |
| ·试剂与仪器 | 第56页 |
| ·scFv-H4 的蛋白序列比对 | 第56页 |
| ·scFv-H4 的同源建模 | 第56-57页 |
| ·scFv-H4 模型的评估 | 第57页 |
| ·scFv-H4 与 AFB1的分子对接 | 第57页 |
| ·用生物素标记 AFB1-BSA | 第57-58页 |
| ·液相亲和力筛选 | 第58页 |
| ·定点饱和突变目的基因 | 第58-59页 |
| ·ELISA | 第59页 |
| ·游离巯基的测定 | 第59-60页 |
| ·排阻色谱测定蛋白质的聚集 | 第60页 |
| ·荧光光谱测定蛋白质的去折叠 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-73页 |
| ·scFv-H4 的一级结构分析 | 第60-62页 |
| ·scFv-H4 模型的建立 | 第62-63页 |
| ·scFv-H4 模型的评估 | 第63-64页 |
| ·抗原与抗体分子对接的结构分析 | 第64-67页 |
| ·CDR L3 的定点突变 | 第67-68页 |
| ·CDR L2 的定点突变 | 第68页 |
| ·CDR H3 的定点突变 | 第68-69页 |
| ·CDR H2 的定点突变 | 第69-70页 |
| ·二硫键的设计，克隆和表达 | 第70-71页 |
| ·scFv-H4 和dscFv-H4 的去折叠 | 第71页 |
| ·scFv-H4 和 dscFv-H4 的聚集 | 第71-73页 |
| ·dscFv-H4 的亲和力 | 第73页 |
| ·本章小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 创新点 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录一 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第80-81页 |
| 附录二 scFv-H4模型的构建 | 第81-86页 |
