| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要符号表 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-21页 |
| 1.1 猪圆环病毒简介 | 第10页 |
| 1.2 PCV2疫苗的研究现状 | 第10-11页 |
| 1.3 亚单位疫苗简介 | 第11-12页 |
| 1.4 蛋白质层析分离技术的简介 | 第12-13页 |
| 1.4.1 凝胶层析 | 第12页 |
| 1.4.2 离子交换层析 | 第12-13页 |
| 1.4.3 亲和层析 | 第13页 |
| 1.5 纳米颗粒作为于佐剂或运输载体的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.5.1 聚合物纳米颗粒(polymeric nanoparticles) | 第14页 |
| 1.5.2 无机纳米颗粒 | 第14-15页 |
| 1.5.3 脂质体 | 第15页 |
| 1.5.4 免疫刺激复合物(Immunostimulating complex,ISCOM) | 第15-16页 |
| 1.5.5 病毒样颗粒 | 第16页 |
| 1.5.6 自组装蛋白 | 第16-17页 |
| 1.5.7 乳化剂 | 第17页 |
| 1.6 纳米颗粒与抗原的相互作用 | 第17-18页 |
| 1.7 BN的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.8 本课题研究的目的及主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 原核表达系统的构建 | 第21-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第21页 |
| 2.1.2 试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 培养基和溶液 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要的仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 质粒的提取 | 第23页 |
| 2.2.2 聚合酶链式反应(PCR) | 第23-24页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
| 2.2.4 DNA片段的回收 | 第24页 |
| 2.2.5 DNA酶切反应 | 第24-25页 |
| 2.2.6 目的基因与T载体连接 | 第25页 |
| 2.2.7 DNA的酶连反应 | 第25-26页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第26页 |
| 2.2.9 阳性菌落的筛选 | 第26页 |
| 2.2.10 阳性细菌测序验证 | 第26页 |
| 2.2.11 重组表达细菌的构建 | 第26页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第26-29页 |
| 2.3.1 ORF2基因重组表达系统的构建 | 第26-29页 |
| 2.3.1.1 ORF2基因的克隆 | 第26页 |
| 2.3.1.2 ORF2与T载体的重组 | 第26-28页 |
| 2.3.1.3 ORF2基因重组表达载体构建 | 第28页 |
| 2.3.1.4 重组表达细菌的构建 | 第28-29页 |
| 2.4 本章小结与讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 PCV2衣壳蛋白的表达与纯化 | 第31-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 3.1.3 主要溶液和试剂配制 | 第31-32页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1 细菌复苏 | 第33页 |
| 3.2.2 表达菌株的诱导表达 | 第33-34页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE | 第34页 |
| 3.2.4 细菌的扩大培养及目的蛋白大量表达 | 第34-35页 |
| 3.2.5 细胞处理及样品的制备 | 第35页 |
| 3.2.6 亲和层析纯化重组蛋白 | 第35页 |
| 3.2.7 镍离子亲和层析的再生 | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第36-40页 |
| 3.3.1 重组工程菌的诱导表达 | 第36-37页 |
| 3.3.2 重组蛋白的可溶性分析 | 第37-39页 |
| 3.3.3 目的蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 3.4 本章小结与讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 BN偶联蛋白聚合物的制备及体外评价 | 第41-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第41页 |
| 4.1.2 主要溶液及缓冲液 | 第41-42页 |
| 4.1.3 主要仪器及设备 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 4.2.1 h-BN纳米颗粒结构表征 | 第42页 |
| 4.2.2 h-BN胶体溶液的制备以及胶体粒子Zeta电位的检测 | 第42页 |
| 4.2.3 h-BN的表面氨基化 | 第42-43页 |
| 4.2.4 BSA与h-BN偶联 | 第43页 |
| 4.2.5 偶联产物的表征 | 第43页 |
| 4.2.6 Bradford法测蛋白浓度 | 第43页 |
| 4.2.7 h-BN载药量测定 | 第43页 |
| 4.2.8 蛋白体外释放实验 | 第43-44页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第44-52页 |
| 4.3.1 h-BN纳米颗粒的X射线光电子能谱(XPS)分析 | 第44-45页 |
| 4.3.2 h-BN纳米颗粒的红外光谱分析 | 第45-46页 |
| 4.3.3 h-BN的电镜观察结果 | 第46-47页 |
| 4.3.4 h-BN胶体的Zeta电位测试 | 第47-48页 |
| 4.3.5 偶联产物的鉴定 | 第48-50页 |
| 4.3.6 标准曲线 | 第50-51页 |
| 4.3.7 h-BN的载药量的测定 | 第51页 |
| 4.3.8 BSA体外释放率的测定 | 第51-52页 |
| 4.4 本章小结与讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 疫苗制备及动物免疫 | 第53-62页 |
| 5.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 5.1.1 主要试剂与材料 | 第53页 |
| 5.1.2 溶液配置 | 第53-54页 |
| 5.1.3 仪器与设备 | 第54页 |
| 5.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 5.2.1 疫苗佐剂的制备 | 第54-55页 |
| 5.2.1.1 氢氧化铝佐剂制备 | 第54页 |
| 5.2.1.2 金纳米颗粒的制备 | 第54-55页 |
| 5.2.2 Bradford法测重组Cap蛋白质浓度 | 第55页 |
| 5.2.3 疫苗的制备 | 第55页 |
| 5.2.3.1 氢氧化铝佐剂疫苗的制备 | 第55页 |
| 5.2.3.2 白油佐剂疫苗的制备 | 第55页 |
| 5.2.3.3 BN佐剂疫苗的制备 | 第55页 |
| 5.2.3.4 金纳米颗粒疫苗制备 | 第55页 |
| 5.2.4 动物免疫实验 | 第55-56页 |
| 5.2.5 间接ELISA测血清抗体效价 | 第56页 |
| 5.2.6 双抗体夹心法测血清中的IFN-γ的浓度 | 第56页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第56-61页 |
| 5.3.1 蛋白质浓度的测定 | 第56-57页 |
| 5.3.2 抗体效价测定 | 第57-59页 |
| 5.3.3 IFN-γ浓度测定 | 第59-61页 |
| 5.3.3.1 IFN-γ标准曲线制作 | 第59-60页 |
| 5.3.3.2 小鼠血清IFN-γ的检测 | 第60-61页 |
| 5.4 本章小结与讨论 | 第61-62页 |
| 全文总结与展望 | 第62-63页 |
| 总结 | 第62页 |
| 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-76页 |
| 附录1 pGEX-4T-1质粒图谱 | 第75页 |
| 附录2 pET32a质粒图谱 | 第75-76页 |
| 个人简历 | 第76页 |
| 个人概况 | 第76页 |
| 教育背景 | 第76页 |
| 在读期间已发表论文 | 第76页 |
| 在校期间参与的科研项目 | 第76页 |
