| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一部分 引言 | 第9-28页 |
| 一、SOX 家族基因及其研究进展 | 第9-13页 |
| （一） SOX 家族成员 | 第9-10页 |
| （二） SOX 家族蛋白的结构及功能 | 第10-12页 |
| （三） SOX7 基因及其功能研究 | 第12-13页 |
| 二、组蛋白乙酰化修饰、DNA 甲基化与真核生物基因的转录调控 | 第13-17页 |
| （一） 真核生物的染色质结构与转录调控的关系 | 第13-14页 |
| （二） 可逆的组蛋白乙酰化修饰与转录调控 | 第14-15页 |
| （三） DNA 甲基化与基因转录调控 | 第15-17页 |
| 三、Wnt 信号转导通路 | 第17-19页 |
| （一） Wnt 信号转导通路的组成 | 第17-19页 |
| （二） Wnt 信号转导通路与肿瘤 | 第19页 |
| 四、DNMT 家族基因及其与肿瘤的关系 | 第19-20页 |
| （一） DNMT 家族成员 | 第19-20页 |
| （二） DNMT 家族与肿瘤的关系 | 第20页 |
| 五、细胞凋亡与衰老 | 第20-25页 |
| （一） 细胞凋亡研究背景 | 第20-21页 |
| （二） 细胞凋亡相关基因 | 第21-22页 |
| （三） 细胞凋亡相关信号通路 | 第22-23页 |
| （四） 细胞衰老研究背景 | 第23页 |
| （五） 细胞衰老相关途径 | 第23-25页 |
| （六） 细胞凋亡与细胞衰老的关系 | 第25页 |
| 六、本论文研究的内容与意义 | 第25-28页 |
| （一） 立题依据 | 第25-26页 |
| （二） 本文研究内容和意义 | 第26-28页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第28-48页 |
| 一、实验材料 | 第28-29页 |
| （一） 质粒 | 第28页 |
| （二） 蛋白质和抗体 | 第28页 |
| （三） 哺乳动物细胞系 | 第28页 |
| （四） 组织样本 | 第28页 |
| （五） 试剂 | 第28-29页 |
| （六） 实验仪器 | 第29页 |
| 二、实验方法 | 第29-48页 |
| Ⅰ. 分子生物学实验方法 | 第29-40页 |
| （一） 分子克隆 | 第29页 |
| （二） DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| （三） 质粒大量制备的方法 | 第29-32页 |
| （四） 哺乳动物细胞总RNA 的提取和反转录 | 第32-33页 |
| （五） PCR 和荧光实时定量（Real-time）PCR | 第33-35页 |
| （六） 染色质免疫沉淀（Chromatin immunoprecipitation，ChIP） | 第35-39页 |
| （七） RNA 干涉（siRNA） | 第39页 |
| （八） 甲基化特异性PCR（MSP） | 第39-40页 |
| （九） 亚硫酸氢盐测序 | 第40页 |
| Ⅱ. 细胞生物学实验方法 | 第40-47页 |
| （一） 哺乳动物细胞系的培养 | 第40-41页 |
| （二） 磷酸钙瞬时转染法 | 第41-42页 |
| （三） 荧光素酶报告基因检测 | 第42页 |
| （四） 脂质体转染 | 第42页 |
| （五） Western Blotting 检测 | 第42-44页 |
| （六） 免疫共沉淀（coimmuno-precipitation assay，CoIP ） | 第44-45页 |
| （七） Hoechst33342 染色检测细胞凋亡 | 第45-46页 |
| （八） Caspase3/7 活性检测法检测细胞凋亡 | 第46页 |
| （九） TUNEL 染色检测细胞凋亡 | 第46页 |
| （十） MTT 法检测细胞活力 | 第46-47页 |
| （十一） SA-β-gal 染色方法检测细胞衰老 | 第47页 |
| Ⅲ. 统计分析 | 第47-48页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第48-71页 |
| PartⅠ 转录因子SOX7 在结肠癌抑癌中的作用及机制研究 | 第48-58页 |
| 一、SOX7 基因在结肠癌细胞系及结肠癌组织中的表达情况 | 第48-49页 |
| （一） SOX7 在结肠癌细胞系中的表达情况 | 第48-49页 |
| （二） SOX7 在结肠癌组织中的表达情况 | 第49页 |
| 二、DNA 甲基化参与SOX7 基因的表达调控及机制 | 第49-52页 |
| （一） DNA 甲基化参与SOX 基因的表达调控 | 第49-50页 |
| （二） 在结肠癌细胞及结肠癌组织中SOX7 基因启动子高甲基化 | 第50-52页 |
| 三、SOX7 在结肠癌抑癌中的作用 | 第52-55页 |
| （一） SOX7 表达质粒构建 | 第52页 |
| （二） SOX7 促进结肠癌SW480 细胞凋亡 | 第52-53页 |
| （三） SOX7 抑制结肠癌SW480 细胞的增殖及克隆形成 | 第53-54页 |
| （四） 干涉SOX7 对293T 细胞增殖的影响 | 第54-55页 |
| 四、SOX7 对结肠癌中活化的Wnt 信号转导通路的影响 | 第55-58页 |
| （一） SOX7 对Wnt 通路下游效应子TCF 报告基因的影响 | 第56页 |
| （二） SOX7 对Wnt 通路靶基因survivin 及cyclinD1 的影响 | 第56-58页 |
| Part Ⅱ DNA 甲基转移酶 DNMT3a 在阿霉素诱导结肠癌衰老与凋亡转换中的作用及机制研究 | 第58-71页 |
| 一、阿霉素诱导结肠癌衰老与凋亡模型下DNMTs 的表达 | 第58-62页 |
| （一） 阿霉素诱导结肠癌衰老与凋亡模型验证 | 第58-59页 |
| （二） 阿霉素诱导结肠癌衰老与凋亡过程中相关基因表达情况 | 第59-60页 |
| （三） 阿霉素诱导结肠癌细胞衰老与凋亡过程中DNMT 家族基因表达情况 | 第60-61页 |
| （四） 7-乙基-10-羟基喜树碱（SN-38）及依托泊甙（VP-16）对DNMT3a 的调控 | 第61-62页 |
| 二、p53 参与阿霉素对DNMT3a 的调控 | 第62-64页 |
| （一） 阿霉素刺激结肠癌细胞系SW480 及HCT116 细胞中DNMT3a 及p21 的表达情况 | 第62-63页 |
| （二） 干涉p53 对阿霉素诱导的DNMT3a 表达的影响 | 第63-64页 |
| 三、DNMT3a 在阿霉素诱导的结肠癌衰老与凋亡转换中的作用 | 第64-66页 |
| （一） 干涉DNMT3a 对阿霉素诱导的结肠癌HCT116 细胞衰老的影响 | 第64-65页 |
| （二） 过表达DNMT3a 对阿霉素诱导的结肠癌HCT116 细胞凋亡的影响 | 第65-66页 |
| 四、DNMT3a 对阿霉素刺激下p21 基因表达的影响 | 第66-67页 |
| 五、DNMT3a 参与阿霉素对p21 调控的分子机制 | 第67-71页 |
| （一） 阿霉素刺激结肠癌HCT116 细胞p21 启动子DNA 甲基化变化情况 | 第67-68页 |
| （二） DNMT3a、p53、HDAC1 及组蛋白乙酰化修饰在阿霉素诱导的p21 基因表达中的作用 | 第68-69页 |
| （三） DNMT3a、p53、HDAC1 在阿霉素刺激的结肠癌细胞中的结合情况 | 第69-71页 |
| 第四部分 讨论 | 第71-74页 |
| 一、Wnt 通路抑制子在不同癌症类型中多受DNA 甲基化调控而失活 | 第71页 |
| 二、SOX7 抑制Wnt 通路，诱导结肠癌细胞凋亡抑制结肠癌增殖 | 第71-72页 |
| 三、DNMT3a 参与阿霉素诱导的结肠癌细胞衰老与凋亡转换 | 第72页 |
| 四、DNMT3a 参与阿霉素对p21 的调控 | 第72-73页 |
| 五、DNMT3a 与HDAC1 共同参与了阿霉素对p21 的调控 | 第73-74页 |
| 主要结论和创新点 | 第74-75页 |
| 一、主要结论 | 第74页 |
| 二、主要创新点 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-90页 |
| 附录 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第93页 |
