| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第14-38页 |
| 第一章 精子发生 | 第14-27页 |
| 1.1 精原干细胞 | 第15-21页 |
| 1.1.1 精原干细胞的分化模型 | 第15-17页 |
| 1.1.3 精原干细胞的移植 | 第17页 |
| 1.1.4 精原干细胞的体外培养 | 第17-18页 |
| 1.1.5 精原干细胞的微环境 | 第18-19页 |
| 1.1.6 精原干细胞的分化调控 | 第19-21页 |
| 1.2 精母细胞与减数分裂 | 第21-23页 |
| 1.3 精子变形 | 第23-24页 |
| 1.4 精子发生的表观调控 | 第24-27页 |
| 1.4.1 DNA甲基化在精子发生中的调控功能 | 第24-25页 |
| 1.4.2 组蛋白修饰在精子发生中的调控功能 | 第25-26页 |
| 1.4.3 miRNA在精子发生中的调控功能 | 第26-27页 |
| 第二章 m~6A修饰研究进展 | 第27-38页 |
| 2.1 m~6A的分布与拓扑学 | 第27-28页 |
| 2.2 m~6A的甲基化 | 第28-29页 |
| 2.3 m~6A的擦除 | 第29-31页 |
| 2.4 m~6A的识别——“m~6A阅读器” | 第31-33页 |
| 2.5 m~6A的生物学功能 | 第33-36页 |
| 2.6 m~6A的主要研究技术 | 第36-38页 |
| 试验部分 | 第38-93页 |
| 第三章 m~6A去甲基化酶FTO在小鼠精原细胞中的功能研究 | 第38-62页 |
| 3.1 材料和方法 | 第38-39页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第38页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第38页 |
| 3.1.3 主要材料和试剂 | 第38-39页 |
| 3.2 试验步骤 | 第39-50页 |
| 3.2.1 在GC-1 细胞中敲除FTO基因 | 第39-42页 |
| 3.2.2 斑点印迹法(Dot-blot)检测m~6A水平 | 第42-43页 |
| 3.2.3 敲除株的表型观察与检测 | 第43-46页 |
| 3.2.4 表型挽救试验 | 第46-47页 |
| 3.2.5 RNA降解试验 | 第47-49页 |
| 3.2.6 MeRIP-qPCR检测靶基因的m~6A水平 | 第49-50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-60页 |
| 3.3.1 利用CRISPR/Cas9 技术在GC-1 细胞中敲除FTO | 第50-52页 |
| 3.3.2 FTO的敲除引起精原细胞m~6A水平升高 | 第52页 |
| 3.3.3 FTO缺失引起多倍体和异倍体比例增多 | 第52-54页 |
| 3.3.4 FTO缺失引起细胞染色体分离异常 | 第54-55页 |
| 3.3.5 FTO缺失引起细胞周期的G2/M阻滞 | 第55-56页 |
| 3.3.6 FTO敲除表型的挽救和突变试验 | 第56-58页 |
| 3.3.7 FTO调控染色体分离和细胞周期的机制探究 | 第58-60页 |
| 3.4 .讨论 | 第60-61页 |
| 3.5 小结 | 第61-62页 |
| 第四章 m~6A识别蛋白YTHDF2 调控小鼠精原细胞与基质的黏附 | 第62-86页 |
| 4.1 材料和方法 | 第62-63页 |
| 4.1.1 细胞系 | 第62页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 4.1.3 相关抗体 | 第62页 |
| 4.1.4 相关试剂配制 | 第62-63页 |
| 4.2 试验步骤 | 第63-70页 |
| 4.2.1 YTHDF2-KO细胞系的构建 | 第63页 |
| 4.2.2 脱靶效应检测 | 第63页 |
| 4.2.3 YTHDF2 敲除细胞的表型检测 | 第63-65页 |
| 4.2.4 表型挽救试验 | 第65-66页 |
| 4.2.5 转录组测序 | 第66-67页 |
| 4.2.6 定量PCR验证测序结果 | 第67-68页 |
| 4.2.7 YTHDF2 蛋白-RNA免疫沉淀试验 | 第68-70页 |
| 4.2.8 靶基因m RNA稳定性检测 | 第70页 |
| 4.3 结果与分析 | 第70-83页 |
| 4.3.1 利用CRISPR/Cas9 技术构建YTHDF2-KO细胞系 | 第70-72页 |
| 4.3.2 YTHDF2 敲除影响GC-1 细胞增殖 | 第72-74页 |
| 4.3.3 YTHDF2 的敲除影响细胞黏附 | 第74-76页 |
| 4.3.4 YTHDF2-KO细胞的转录组测序 | 第76-82页 |
| 4.3.5 YTHDF2 调控表型机制探究 | 第82-83页 |
| 4.4 讨论 | 第83-84页 |
| 4.5 小结 | 第84-86页 |
| 第五章 YTHDF2 在小鼠分化的精原细胞中的功能研究 | 第86-93页 |
| 5.1 材料和方法 | 第86页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第86页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第86页 |
| 5.2 试验步骤 | 第86-88页 |
| 5.2.1 小鼠的饲养和配种 | 第86页 |
| 5.2.2 小鼠基因型检测 | 第86-87页 |
| 5.2.3 小鼠表型检测 | 第87-88页 |
| 5.3 实验结果 | 第88-91页 |
| 5.3.1 YTHDF2 在小鼠睾丸中的表达检测 | 第88-89页 |
| 5.3.2 YTHDF2 条件敲除鼠的生产 | 第89-90页 |
| 5.3.3 YTHDF2 条件敲除鼠的表型检测 | 第90-91页 |
| 5.4 讨论 | 第91-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 本研究创新点 | 第94页 |
| 后续研究工作 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-109页 |
| 附录 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 个人简历 | 第112页 |
