| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-10页 |
| Abstract | 第10-17页 |
| 缩略词表 | 第18-23页 |
| 前言 | 第23-27页 |
| 第一章 TG2在乙肝病毒阳性肝细胞癌中的表达及作用 | 第27-46页 |
| 1 材料与方法 | 第27-38页 |
| 1.1 样本材料来源 | 第27-28页 |
| 1.2 实验材料 | 第28-30页 |
| 1.2.1 主要实验材料和试剂 | 第28-29页 |
| 1.2.2 主要实验仪器、耗材和统计软件 | 第29-30页 |
| 1.3 实验方法 | 第30-38页 |
| 1.3.1 免疫组化染色 | 第30-32页 |
| 1.3.2 细胞培养 | 第32页 |
| 1.3.3 提取总RNA | 第32-33页 |
| 1.3.4 反转录PCR | 第33页 |
| 1.3.5 实时定量PCR | 第33-34页 |
| 1.3.6 蛋白质免疫印迹分析 | 第34-36页 |
| 1.3.7 脂质体介导的转染 | 第36页 |
| 1.3.8 细胞生长测定 | 第36-37页 |
| 1.3.9 迁移和侵袭实验 | 第37页 |
| 1.3.10 划痕实验 | 第37-38页 |
| 1.4 统计分析 | 第38页 |
| 2 研究结果 | 第38-44页 |
| 2.1 肝癌及癌旁组织免疫组化染色结果 | 第38-39页 |
| 2.2 肝癌及癌旁组织中TG2mRNA的RT PCR结果 | 第39-40页 |
| 2.3 TG2 mRNA在5种肝癌细胞系中的表达 | 第40-41页 |
| 2.4 TG2shRNA敲减HepG2.2.15、HEP3B细胞的结果 | 第41页 |
| 2.5 MTT实验结果 | 第41-42页 |
| 2.6 划痕实验结果 | 第42-43页 |
| 2.7 Transwell实验结果 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 4 结论 | 第45-46页 |
| 第二章 TG2在甲胎蛋白阴性的乙肝病毒阳性肝细胞癌中的表达及作用 | 第46-72页 |
| 1 材料与方法 | 第46-60页 |
| 1.1 乙肝合并原发性肝癌患者入组标准 | 第46-48页 |
| 1.2 实验材料 | 第48-50页 |
| 1.2.1 主要实验材料和试剂 | 第48-49页 |
| 1.2.2 主要实验仪器、耗材和统计软件 | 第49-50页 |
| 1.3 实验方法 | 第50-60页 |
| 1.3.1 临床样本处理 | 第50-53页 |
| 1.3.1.1 58例冰冻的HCC及癌旁组织石蜡包埋 | 第50页 |
| 1.3.1.2 免疫组化分析、测定TG2蛋白的表达 | 第50页 |
| 1.3.1.3 RTPCR方法检测TG2的表达 | 第50页 |
| 1.3.1.4 总RNA提取 | 第50-51页 |
| 1.3.1.5 cDNA合成 | 第51-53页 |
| 1.3.2 细胞培养、鉴定 | 第53页 |
| 1.3.3 miR-TG2慢病毒载体构建 | 第53-56页 |
| 1.3.4 miR-TG2慢病毒包装 | 第56页 |
| 1.3.5 转染后慢病毒的收获及浓缩 | 第56-57页 |
| 1.3.6 慢病毒滴度检测方法 | 第57页 |
| 1.3.7 荧光显微镜下验证TG2慢病毒感染的5种细胞 | 第57-58页 |
| 1.3.8 CCK-8检测5种细胞增殖活性 | 第58页 |
| 1.3.9 HepG2.2.15和Hep3B细胞感染TG2shRAN1LV5慢病毒后细胞迁移的变化 | 第58-59页 |
| 1.3.10 HepG2.2.15和Hep3B细胞感染TG2慢病毒后细胞侵袭的变化 | 第59-60页 |
| 1.3.11 HepG2.2.15和Hep3B细胞感染TG2shRNA1LV5慢病毒后细胞凋亡的变化 | 第60页 |
| 1.3.12 RT PCR方法检测TG2在5种肝癌细胞内的表达 | 第60页 |
| 1.4 统计分析 | 第60页 |
| 2 实验结果 | 第60-71页 |
| 2.1 肝癌及癌旁组织免疫组化染色结果 | 第60-62页 |
| 2.2 肝癌组织及癌旁组织中TG2的RT PCR结果 | 第62-63页 |
| 2.3 miR-TG2慢病毒载体构建 | 第63-71页 |
| 2.3.1 筛选最佳干扰序列 | 第63-64页 |
| 2.3.2 载体构建慢病毒包装结果 | 第64页 |
| 2.3.3 荧光定量检测TG2shRNA1慢病毒侵染5种细胞系结果 | 第64-66页 |
| 2.3.4 CCK-8检测5种肝癌细胞活性 | 第66-67页 |
| 2.3.5 HepG2.2.15和Hep3B细胞感染TG2慢病毒后细胞迁移的变化 | 第67-69页 |
| 2.3.6 HepG2.2.15和Hep3B细胞感染TG2慢病毒后细胞侵袭的变化 | 第69-70页 |
| 2.3.7 HepG2.2.15和Hep3B细胞感染TG2慢病毒后凋亡的变化 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71页 |
| 4 结论 | 第71-72页 |
| 第三章 TG2敲减HepG2.2.15细胞对裸鼠成瘤的影响 | 第72-77页 |
| 1 实验材料与方法 | 第72-73页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第72页 |
| 1.2 实验方法 | 第72-73页 |
| 1.2.1 动物准备 | 第72页 |
| 1.2.2 动物分组 | 第72页 |
| 1.2.3 动物模型构建及观察 | 第72-73页 |
| 1.3 统计分析 | 第73页 |
| 2 实验结果 | 第73-76页 |
| 3 结论 | 第76-77页 |
| 第四章 TG2在HBV阳性肝细胞癌中的促瘤机制 | 第77-88页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第81页 |
| 1.1 实验试剂 | 第81页 |
| 1.2 实验仪器 | 第81页 |
| 2 实验方法 | 第81-82页 |
| 2.1 制备SDS-PAGE凝胶 | 第81-82页 |
| 2.2 样品变性及电泳 | 第82页 |
| 2.3 凝胶转膜及其检测 | 第82页 |
| 2.4 统计分析 | 第82页 |
| 3 结果 | 第82-86页 |
| 3.1 5种通路蛋白在HBV阳性肝癌细胞系中的表达 | 第82-84页 |
| 3.2 5种通路蛋白在裸鼠成瘤组织中的表达 | 第84-85页 |
| 3.3 ERK1/2 (MAPK) -NFκB通路在裸鼠成瘤组织中的表达 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86-87页 |
| 5 结论 | 第87-88页 |
| 全文总结 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-95页 |
| 综述 | 第95-106页 |
| 参考文献 | 第103-106页 |
| 作者简历及在读期间取得的科研成果 | 第106页 |
