猪瘟病毒E2蛋白原核表达及BLP疫苗初步研究
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号与缩略语 | 第12-13页 |
| 绪论 | 第13-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-42页 |
| 第一章 GEM-PA表面展示系统的研究进展 | 第14-24页 |
| 1 微生物表面展示技术研究进展 | 第14-15页 |
| 2 乳酸菌表面展示系统 | 第15-16页 |
| 3 GEM-PA表面展示系统 | 第16-19页 |
| 3.1 GEM颗粒 | 第16页 |
| 3.2 锚钩蛋白 | 第16页 |
| 3.3 LysM | 第16-17页 |
| 3.4 GEM-PA展示系统在疫苗研发中的运用 | 第17-19页 |
| 参考文献 | 第19-24页 |
| 第二章 猪瘟及猪瘟病毒的研究进展 | 第24-42页 |
| 1 猪瘟病毒分子生物学特性 | 第24-27页 |
| 1.1 猪瘟病毒分子及理化状态 | 第24-25页 |
| 1.2 猪瘟病毒的结构蛋白及其功能 | 第25-27页 |
| 2 猪瘟病毒的研究近况 | 第27-29页 |
| 2.1 猪瘟病毒的感染和致病机理 | 第27页 |
| 2.2 猪瘟的流行病学 | 第27-29页 |
| 3 猪瘟疫苗的研究进展 | 第29-32页 |
| 3.1 基因工程亚单位疫苗 | 第29-30页 |
| 3.2 嵌合疫苗 | 第30-31页 |
| 3.3 DNA疫苗 | 第31页 |
| 3.4 病毒活载体疫苗 | 第31-32页 |
| 4 猪瘟病毒实验室检测技术研究进展 | 第32-33页 |
| 4.1 病毒的分离鉴定 | 第32页 |
| 4.2 酶联免疫吸附试验 | 第32-33页 |
| 4.3 免疫荧光试验 | 第33页 |
| 4.4 反转录-聚合酶链式反应 | 第33页 |
| 5 展望 | 第33-35页 |
| 参考文献 | 第35-42页 |
| 第二篇 试验研究 | 第42-78页 |
| 第一章 猪瘟病毒E2蛋白的表达与纯化 | 第42-52页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 1.1 材料 | 第43页 |
| 1.2 主要仪器 | 第43页 |
| 1.3 GEM颗粒的制备 | 第43页 |
| 1.4 原核表达载体pET-E2-PA3的构建 | 第43-44页 |
| 1.5 猪瘟病毒E2蛋白的诱导表达 | 第44页 |
| 1.6 猪瘟病毒E2蛋白的鉴定 | 第44-45页 |
| 1.7 猪瘟病毒E2蛋白与GEM的结合及鉴定 | 第45页 |
| 1.8 猪瘟病毒E2蛋白宿主菌优化 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-49页 |
| 2.1 GEM颗粒制备鉴定 | 第45页 |
| 2.2 pET-E2-PA3重组载体的鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3 猪瘟病毒E2蛋白的表达鉴定 | 第46-47页 |
| 2.4 猪瘟病毒E2蛋白与GEM颗粒结合鉴定 | 第47-48页 |
| 2.5 猪瘟病毒E2蛋白的优化表达 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-52页 |
| 第二章 猪瘟BLP疫苗免疫原性的鉴定 | 第52-64页 |
| 1 材料与方法 | 第53-55页 |
| 1.1 主要材料和试剂 | 第53页 |
| 1.2 主要仪器 | 第53页 |
| 1.3 猪瘟BLP疫苗抗原的制备 | 第53-54页 |
| 1.4 猪瘟BLP疫苗的制备及免疫 | 第54页 |
| 1.5 小鼠CSFV E2特异性抗体的检测 | 第54页 |
| 1.6 小鼠脾淋巴细胞增殖试验 | 第54-55页 |
| 1.7 IFN-γ和IL-4 mRNA的检测 | 第55页 |
| 2 结果 | 第55-60页 |
| 2.1 猪瘟BLP疫苗抗原的鉴定 | 第55-57页 |
| 2.2 小鼠E2特异性抗体检测 | 第57-58页 |
| 2.3 小鼠脾淋巴细胞增殖试验 | 第58-59页 |
| 2.4 IFN-γ和IL-4 mRNA检测 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-64页 |
| 第三章 猪瘟直接免疫荧光抗体的表达及鉴定 | 第64-78页 |
| 1 材料与方法 | 第65-68页 |
| 1.1 病毒、细胞和试剂 | 第65页 |
| 1.2 主要仪器 | 第65页 |
| 1.3 猪瘟荧光抗体重组载体的构建 | 第65-66页 |
| 1.4 猪瘟荧光抗体的表达与鉴定 | 第66页 |
| 1.5 猪瘟荧光蛋白的纯化与定量 | 第66-67页 |
| 1.6 猪瘟荧光抗体直接免疫荧光方法的建立 | 第67-68页 |
| 2 结果 | 第68-73页 |
| 2.1 pET-SE重组质粒的酶切鉴定 | 第68页 |
| 2.2 猪瘟荧光抗体的表达鉴定 | 第68-70页 |
| 2.3 猪瘟荧光抗体的纯化 | 第70页 |
| 2.4 猪瘟荧光抗体应用结果 | 第70-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-78页 |
| 全文总结 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 作者简历 | 第82-84页 |
| 研究生期间发表论文 | 第84页 |
