| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词(Abbreviation) | 第7-12页 |
| 前言 | 第12-25页 |
| 1. DNA聚合酶的概况 | 第12-17页 |
| 1.1. DNA聚合酶的分类 | 第12-13页 |
| 1.2. Taq DNA聚合酶概述 | 第13-15页 |
| 1.3. Pfu DNA聚合酶概述 | 第15-17页 |
| 2. DNA聚合酶用于复杂样本PCR的概况 | 第17-19页 |
| 3. 实时荧光定量PCR技术发展的概况 | 第19-23页 |
| 3.1. 荧光检测方法 | 第20-22页 |
| 3.2. 热启动聚合酶 | 第22-23页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第23-25页 |
| 材料与方法 | 第25-42页 |
| 1. 材料 | 第25-26页 |
| 1.1. 主要仪器 | 第25页 |
| 1.2. 菌种和质粒 | 第25页 |
| 1.3. 细胞及实验动物 | 第25-26页 |
| 1.4. 试剂及耗材 | 第26页 |
| 2. 方法 | 第26-42页 |
| 2.1. 常用溶液及试剂的配制 | 第26-28页 |
| 2.2. 常规分子生物学实验 | 第28-34页 |
| 2.3. 单克隆抗体筛选相关实验 | 第34-38页 |
| 2.4. 克隆及评价相关引物探针的设计 | 第38-42页 |
| 结果与分析 | 第42-77页 |
| 1. Pfu DNA聚合酶的改造 | 第42-63页 |
| 1.1 Pfu聚合酶改造克隆的设计、纯化和活性评价 | 第42-53页 |
| 1.2 Pfu聚合酶抗体的筛选 | 第53-62页 |
| 1.3 小结 | 第62-63页 |
| 2. Pfu-mut DNA聚合酶扩增复杂样本的效果评价 | 第63-73页 |
| 2.1. 分子信标qPCR体系的摸索 | 第63-67页 |
| 2.2. Pfu-mut聚合酶血清样本qPCR的效果评价 | 第67-71页 |
| 2.3. Pfu-mut聚合酶扩增高GC靶标的效果评价 | 第71-72页 |
| 2.4. 小结 | 第72-73页 |
| 3. TNF-Pfu-mut DNA聚合酶扩增复杂样本的效果评价 | 第73-77页 |
| 3.1. TNF-Pfu-mut聚合酶血清样本qPCR的效果评价 | 第73-75页 |
| 3.2. TNF-Pfu-mut聚合酶扩增高GC靶标的效果评价 | 第75页 |
| 3.3 小结 | 第75-77页 |
| 讨论 | 第77-81页 |
| 1. Pfu聚合酶对不同血液样本和靶标浓度的耐干扰能力 | 第77-78页 |
| 2. Pfu聚合酶与Taq-N端蛋白融合后的相互影响 | 第78-79页 |
| 3. Pfu聚合酶抗体的筛选和作用 | 第79页 |
| 4. Pfu聚合酶扩增效率的提高 | 第79-81页 |
| 总结与展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
