摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
第一章 前言 | 第16-26页 |
1.1 乳腺癌概述 | 第16-20页 |
1.1.1 乳腺癌现状 | 第16页 |
1.1.2 三阴性乳腺癌 | 第16-17页 |
1.1.3 乳腺癌综合治疗 | 第17-19页 |
1.1.4 癌症与甲基化的关系 | 第19-20页 |
1.2 WDR家族背景及研究现状 | 第20-21页 |
1.2.1 WDR蛋白家族背景 | 第20页 |
1.2.2 WDR相关蛋白参与调节癌症的信号机理 | 第20-21页 |
1.3 WDR41基因简介 | 第21-25页 |
1.3.1 WDR41来源 | 第21-23页 |
1.3.2 WDR41的基因背景 | 第23页 |
1.3.3 WDR41的生物学功能 | 第23-25页 |
1.4 该课题研究的目的和意义 | 第25-26页 |
第二章 实验材料与方法 | 第26-50页 |
2.1 实验材料 | 第26-31页 |
2.1.1 实验菌株、细胞、质粒 | 第26页 |
2.1.2 主要实验仪器与设备 | 第26-27页 |
2.1.3 主要试剂与药品 | 第27-29页 |
2.1.4 常用溶液 | 第29-31页 |
2.2 实验方法 | 第31-48页 |
2.2.1 PCR及pEGFP-WDR41真核表达载体的构建 | 第31-35页 |
2.2.1.1 引物的设计与合成 | 第31页 |
2.2.1.2 PCR | 第31-32页 |
2.2.1.3 DNA凝胶电泳 | 第32页 |
2.2.1.4 DNA凝胶回收 | 第32-33页 |
2.2.1.5 DNA产物酶切 | 第33页 |
2.2.1.6 连接 | 第33-34页 |
2.2.1.7 转化 | 第34页 |
2.2.1.8 菌液扩大培养 | 第34页 |
2.2.1.9 克隆鉴定 | 第34页 |
2.2.1.10 质粒小量提取 | 第34-35页 |
2.2.1.11 质粒中量提取 | 第35页 |
2.2.1.12 DNA片段以及质粒浓度测定 | 第35页 |
2.2.2 实时定量PCR | 第35-38页 |
2.2.2.1 Trizol提取总RNA | 第35-36页 |
2.2.2.1.1 提取小鼠各个器官组织RNA | 第35页 |
2.2.2.1.2 提取乳腺癌病人样本RNA | 第35-36页 |
2.2.2.1.3 提取细胞RNA | 第36页 |
2.2.2.2 RNA逆转录为cDNA | 第36-37页 |
2.2.2.3 实时定量PCR | 第37-38页 |
2.2.3 甲基化特异性PCR | 第38-41页 |
2.2.3.1 细胞全基因组提取 | 第38页 |
2.2.3.2 甲基化特异性PCR(MSP) | 第38-40页 |
2.2.3.3 5-杂氮胞嘧啶核苷处理细胞 | 第40-41页 |
2.2.4 免疫荧光 | 第41页 |
2.2.5 免疫组化 | 第41-43页 |
2.2.6 免疫印迹 | 第43-44页 |
2.2.7 细胞培养与转染 | 第44-45页 |
2.2.7.1 细胞复苏 | 第44页 |
2.2.7.2 细胞传代 | 第44页 |
2.2.7.3 细胞冻存 | 第44页 |
2.2.7.4 质粒转染 | 第44-45页 |
2.2.7.5 siRNA转染 | 第45页 |
2.2.8 稳转细胞系的建立 | 第45页 |
2.2.9 细胞增殖实验 | 第45-46页 |
2.2.10 细胞迁移实验 | 第46-47页 |
2.2.10.1 划痕实验 | 第46页 |
2.2.10.2 Transwell实验 | 第46-47页 |
2.2.11 细胞周期实验 | 第47页 |
2.2.12 细胞凋亡实验 | 第47页 |
2.2.13 裸鼠成瘤实验 | 第47-48页 |
2.3 本文研究思路 | 第48-49页 |
2.4 数据处理与分析 | 第49-50页 |
第三章 实验结果 | 第50-73页 |
3.1 WDR41结构分析 | 第50-54页 |
3.2 WDR41功能探索 | 第54-73页 |
3.2.1 WDR41的亚细胞定位 | 第54-55页 |
3.2.2 WDR41表达规律的分析 | 第55-61页 |
3.2.2.1 WDR41小鼠组织表达谱分析 | 第55-57页 |
3.2.2.2 WDR41在多种肿瘤细胞系中的表达分析 | 第57页 |
3.2.2.3 WDR41在乳腺癌组织中的表达分析 | 第57-61页 |
3.2.3 探寻WDR41表达差异的原因 | 第61-63页 |
3.2.3.1 MSP法检测WDR41在MDA-MB-231细胞中的甲基化状态 | 第61页 |
3.2.3.2 5-Aza-dC处理MDA-MB-231细胞后WDR41的表达水平 | 第61-63页 |
3.2.4 WDR41的生物学功能探究 | 第63-71页 |
3.2.4.1 WDR41载体的构建 | 第63-64页 |
3.2.4.1.1 PCR扩增WDR41目的片段的阳性结果 | 第63页 |
3.2.4.1.2 菌液PCR鉴定pEGFP-WDR41连接产物 | 第63-64页 |
3.2.4.2 WDR41的功能验证 | 第64-71页 |
3.2.4.2.1 细胞增殖实验 | 第65-66页 |
3.2.4.2.2 细胞迁移实验 | 第66-68页 |
3.2.4.2.3 细胞周期实验 | 第68-69页 |
3.2.4.2.4 细胞凋亡实验 | 第69-70页 |
3.2.4.2.5 裸鼠荷瘤实验 | 第70-71页 |
3.2.5 WDR41抑癌机理的探究 | 第71-73页 |
第四章 讨论 | 第73-78页 |
4.1 WDR41的定位分析 | 第73-74页 |
4.2 WDR41的表达规律分析 | 第74页 |
4.3 MDA-MB-231细胞中WDR41基因启动子区的甲基化状态 | 第74-75页 |
4.4 WDR41的抑癌功能验证 | 第75-76页 |
4.5 对WDR41的后续要开展的研究 | 第76-77页 |
4.6 总结 | 第77-78页 |
参考文献 | 第78-86页 |
致谢 | 第86-87页 |
在学期间发表论文 | 第87页 |