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WDR41在乳腺癌中结构和功能的探索

摘要第4-6页
Abstract第6-7页
第一章 前言第16-26页
    1.1 乳腺癌概述第16-20页
        1.1.1 乳腺癌现状第16页
        1.1.2 三阴性乳腺癌第16-17页
        1.1.3 乳腺癌综合治疗第17-19页
        1.1.4 癌症与甲基化的关系第19-20页
    1.2 WDR家族背景及研究现状第20-21页
        1.2.1 WDR蛋白家族背景第20页
        1.2.2 WDR相关蛋白参与调节癌症的信号机理第20-21页
    1.3 WDR41基因简介第21-25页
        1.3.1 WDR41来源第21-23页
        1.3.2 WDR41的基因背景第23页
        1.3.3 WDR41的生物学功能第23-25页
    1.4 该课题研究的目的和意义第25-26页
第二章 实验材料与方法第26-50页
    2.1 实验材料第26-31页
        2.1.1 实验菌株、细胞、质粒第26页
        2.1.2 主要实验仪器与设备第26-27页
        2.1.3 主要试剂与药品第27-29页
        2.1.4 常用溶液第29-31页
    2.2 实验方法第31-48页
        2.2.1 PCR及pEGFP-WDR41真核表达载体的构建第31-35页
            2.2.1.1 引物的设计与合成第31页
            2.2.1.2 PCR第31-32页
            2.2.1.3 DNA凝胶电泳第32页
            2.2.1.4 DNA凝胶回收第32-33页
            2.2.1.5 DNA产物酶切第33页
            2.2.1.6 连接第33-34页
            2.2.1.7 转化第34页
            2.2.1.8 菌液扩大培养第34页
            2.2.1.9 克隆鉴定第34页
            2.2.1.10 质粒小量提取第34-35页
            2.2.1.11 质粒中量提取第35页
            2.2.1.12 DNA片段以及质粒浓度测定第35页
        2.2.2 实时定量PCR第35-38页
            2.2.2.1 Trizol提取总RNA第35-36页
                2.2.2.1.1 提取小鼠各个器官组织RNA第35页
                2.2.2.1.2 提取乳腺癌病人样本RNA第35-36页
                2.2.2.1.3 提取细胞RNA第36页
            2.2.2.2 RNA逆转录为cDNA第36-37页
            2.2.2.3 实时定量PCR第37-38页
        2.2.3 甲基化特异性PCR第38-41页
            2.2.3.1 细胞全基因组提取第38页
            2.2.3.2 甲基化特异性PCR(MSP)第38-40页
            2.2.3.3 5-杂氮胞嘧啶核苷处理细胞第40-41页
        2.2.4 免疫荧光第41页
        2.2.5 免疫组化第41-43页
        2.2.6 免疫印迹第43-44页
        2.2.7 细胞培养与转染第44-45页
            2.2.7.1 细胞复苏第44页
            2.2.7.2 细胞传代第44页
            2.2.7.3 细胞冻存第44页
            2.2.7.4 质粒转染第44-45页
            2.2.7.5 siRNA转染第45页
        2.2.8 稳转细胞系的建立第45页
        2.2.9 细胞增殖实验第45-46页
        2.2.10 细胞迁移实验第46-47页
            2.2.10.1 划痕实验第46页
            2.2.10.2 Transwell实验第46-47页
        2.2.11 细胞周期实验第47页
        2.2.12 细胞凋亡实验第47页
        2.2.13 裸鼠成瘤实验第47-48页
    2.3 本文研究思路第48-49页
    2.4 数据处理与分析第49-50页
第三章 实验结果第50-73页
    3.1 WDR41结构分析第50-54页
    3.2 WDR41功能探索第54-73页
        3.2.1 WDR41的亚细胞定位第54-55页
        3.2.2 WDR41表达规律的分析第55-61页
            3.2.2.1 WDR41小鼠组织表达谱分析第55-57页
            3.2.2.2 WDR41在多种肿瘤细胞系中的表达分析第57页
            3.2.2.3 WDR41在乳腺癌组织中的表达分析第57-61页
        3.2.3 探寻WDR41表达差异的原因第61-63页
            3.2.3.1 MSP法检测WDR41在MDA-MB-231细胞中的甲基化状态第61页
            3.2.3.2 5-Aza-dC处理MDA-MB-231细胞后WDR41的表达水平第61-63页
        3.2.4 WDR41的生物学功能探究第63-71页
            3.2.4.1 WDR41载体的构建第63-64页
                3.2.4.1.1 PCR扩增WDR41目的片段的阳性结果第63页
                3.2.4.1.2 菌液PCR鉴定pEGFP-WDR41连接产物第63-64页
            3.2.4.2 WDR41的功能验证第64-71页
                3.2.4.2.1 细胞增殖实验第65-66页
                3.2.4.2.2 细胞迁移实验第66-68页
                3.2.4.2.3 细胞周期实验第68-69页
                3.2.4.2.4 细胞凋亡实验第69-70页
                3.2.4.2.5 裸鼠荷瘤实验第70-71页
        3.2.5 WDR41抑癌机理的探究第71-73页
第四章 讨论第73-78页
    4.1 WDR41的定位分析第73-74页
    4.2 WDR41的表达规律分析第74页
    4.3 MDA-MB-231细胞中WDR41基因启动子区的甲基化状态第74-75页
    4.4 WDR41的抑癌功能验证第75-76页
    4.5 对WDR41的后续要开展的研究第76-77页
    4.6 总结第77-78页
参考文献第78-86页
致谢第86-87页
在学期间发表论文第87页

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