| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 1. 课题研究的背景及意义 | 第9-10页 |
| 2. 课题研究目的 | 第10页 |
| 3. 本论文主要研究内容 | 第10页 |
| 4. 本论文的创新点 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| 1 纤维素酶 | 第11-17页 |
| ·纤维素酶的研究概况 | 第11-17页 |
| ·纤维素酶的分类及来源 | 第11-12页 |
| ·纤维素酶的生物学特性 | 第12页 |
| ·纤维素酶的催化机制 | 第12页 |
| ·研究历史、现状及发展方向 | 第12-17页 |
| 第二章 黑曲霉内切葡聚糖酶基因的克隆与表达 | 第17-42页 |
| ·材料与方法 | 第17-21页 |
| ·菌株及质粒 | 第17页 |
| ·药品与酶 | 第17-18页 |
| ·仪器设备 | 第18页 |
| ·引物设计 | 第18-19页 |
| ·培养基与主要试剂的配制 | 第19-21页 |
| ·实验方法 | 第21-32页 |
| ·黑曲霉基因组DNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶核酸电泳 | 第23页 |
| ·目的片段的回收 | 第23-24页 |
| ·DNA 浓缩 | 第24页 |
| ·PCR 产物的TA 克隆 | 第24页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 | 第24-25页 |
| ·质粒小量提取 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的PCR 验证 | 第26页 |
| ·目的基因的PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR 扩增产物的割胶回收 | 第27页 |
| ·PCR 扩增产物的双酶切 | 第27页 |
| ·表达载体pPICZαA 的双酶切 | 第27页 |
| ·连接 | 第27-28页 |
| ·感受态细胞TOP10F’的制备与转化 | 第28页 |
| ·阳性质粒的筛选 | 第28页 |
| ·重组质粒的大量提取[29] | 第28-29页 |
| ·重组质粒的线性化(单酶切) | 第29页 |
| ·酵母菌株 GSll5 感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第29-30页 |
| ·酵母重组子的筛选 | 第30页 |
| ·重组毕赤酵母工程菌株的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·内切葡聚糖酶活力测定 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-40页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第32页 |
| ·全序列获得 | 第32-34页 |
| ·阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第34-35页 |
| ·内含子的去除 | 第35页 |
| ·内切葡聚糖酶表达序列 | 第35页 |
| ·内切葡聚糖酶基因Aeng 的PCR 扩增 | 第35-36页 |
| ·内切葡聚糖酶基因Aeng 的双酶切 | 第36页 |
| ·表达载体pPICZαA 的双酶切 | 第36页 |
| ·Aeng 与pPICZαA 表达载体的连接和阳性表达质粒的筛选 | 第36-37页 |
| ·质粒pPICZαA-Aeng 的大量提取及表达载体线性化 | 第37页 |
| ·酵母的电击转化 | 第37-39页 |
| ·重组酵母阳性筛选 | 第39-40页 |
| ·重组毕赤酵母工程菌株的诱导表达 | 第40页 |
| ·小结 | 第40-42页 |
| 第三章 黑曲霉外切葡聚糖酶基因的克隆与表达 | 第42-57页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·外切葡聚糖酶基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·-3.1.9 操作流程同2.2.3-2.2.9 | 第43页 |
| ·目的基因的PCR 扩增 | 第43页 |
| ·-3.1.22 同2.2.11-2.2.22 | 第43页 |
| ·外切葡聚糖酶活力测定 | 第43-44页 |
| ·重组毕赤酵母工程菌蛋白的SDS-PAGE 电泳 | 第44-45页 |
| ·实验结果 | 第45-54页 |
| ·全序列获得及序列比对结果 | 第45-47页 |
| ·阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第47-48页 |
| ·外切葡聚糖酶基因CBHⅡ的PCR 扩增 | 第48页 |
| ·外切葡聚糖酶基因CBHⅡ的双酶切 | 第48页 |
| ·表达载体pPICZαA 的双酶切 | 第48-49页 |
| ·CBHⅡ与pPICZαA 表达载体的连接和阳性表达质粒的筛选 | 第49页 |
| ·质粒pPICZαA- CBHⅡ的大量提取及表达载体线性化 | 第49-50页 |
| ·酵母的电击转化 | 第50页 |
| ·重组酵母阳性筛选 | 第50页 |
| ·重组毕赤酵母工程菌株的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·重组毕赤酵母产酶曲线 | 第51-53页 |
| ·重组毕赤酵母产酶条件优化 | 第53页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第53-54页 |
| ·酶学特性研究 | 第54-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第四章 结论与展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 详细摘要 | 第60-63页 |
