| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 英文缩写说明 | 第10-14页 |
| 1 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 简介 | 第14页 |
| 1.2 手性药物和手性芳香醇 | 第14-17页 |
| 1.3 手性芳香醇的合成方法 | 第17-18页 |
| 1.4 羰基还原酶概述 | 第18-20页 |
| 1.4.1 羰基还原酶的简介 | 第18-19页 |
| 1.4.2 羰基还原酶的催化机制 | 第19页 |
| 1.4.3 辅酶再生方法 | 第19-20页 |
| 1.5 羰基还原酶在合成手性药物前体中的应用 | 第20-23页 |
| 1.6 羰基还原酶的挖掘及改造 | 第23-24页 |
| 1.7 立题依据 | 第24-26页 |
| 1.7.1 本课题的研究背景及研究意义 | 第24-25页 |
| 1.7.2 本课题的研究内容 | 第25-26页 |
| 2 羰基还原酶酶库的构建 | 第26-44页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第26-32页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第28页 |
| 2.1.3 菌株与质粒 | 第28-31页 |
| 2.1.4 引物、基因合成及DNA测序 | 第31页 |
| 2.1.5 培养基与试剂 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.2.1 羰基还原酶酶库的构建 | 第32-34页 |
| 2.2.2 多种潜手性芳香酮底物在羰基还原酶酶库中初步筛选 | 第34-36页 |
| 2.3 实验结果和分析 | 第36-43页 |
| 2.3.1 羰基还原酶酶库的构建 | 第36-40页 |
| 2.3.2 多种潜手性芳香酮底物在羰基还原酶酶库中初步筛选 | 第40-43页 |
| 2.4 本章小结 | 第43-44页 |
| 3 E.coli/pET-28a(+)-KR01等重组工程菌催化3,5-BTAP的研究 | 第44-66页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第44-47页 |
| 3.1.1 材料与试剂 | 第44-46页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第46页 |
| 3.1.3 菌株与质粒 | 第46页 |
| 3.1.4 培养基与试剂 | 第46-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-51页 |
| 3.2.1 E.coli/pET-28a(+)-KR01等重组工程菌诱导表达 | 第47页 |
| 3.2.2 酶库中筛选催化3,5-双三氟甲基苯乙酮的羰基还原酶 | 第47-48页 |
| 3.2.3 重组E.coli培养基优化 | 第48页 |
| 3.2.4 在10L发酵罐中发酵诱导E.coli/pET-28a(+)-KR01重组工程菌 | 第48页 |
| 3.2.5 酶的活力测定 | 第48-49页 |
| 3.2.6 pH对酶活的影响 | 第49页 |
| 3.2.7 酶的温度稳定性 | 第49页 |
| 3.2.8 底物浓度对酶活的影响 | 第49页 |
| 3.2.9 响应面法优化反应条件 | 第49-50页 |
| 3.2.10 E.coli/pET-28a(+)-KR01重组工程菌的重复使用 | 第50页 |
| 3.2.11 产物检测方法 | 第50-51页 |
| 3.3 实验结果和分析 | 第51-65页 |
| 3.3.1 酶库中筛选催化3,5-双三氟甲基苯乙酮的羰基还原酶 | 第51-53页 |
| 3.3.2 E.coli/pET-28a(+)-KR01重组工程菌发酵工艺 | 第53-55页 |
| 3.3.3 KR01催化3,5-BTAP反应条件优化 | 第55-62页 |
| 3.3.4 催化体系放大 | 第62页 |
| 3.3.5 E.coli/pET-28a(+)-KR01重组工程菌全细胞的重复使用 | 第62-65页 |
| 3.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 4 E.coli/pET-28a(+)-KR01等重组工程菌催化CFPO的研究 | 第66-78页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第66-67页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第66-67页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第67页 |
| 4.1.3 菌株与质粒 | 第67页 |
| 4.1.4 培养基与试剂 | 第67页 |
| 4.2 实验方法 | 第67-69页 |
| 4.2.1 E.coli/pET-28a(+)-KR01等重组工程菌诱导表达 | 第67页 |
| 4.2.2 酶库中筛选催化2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮的羰基还原酶 | 第67页 |
| 4.2.3 在10L发酵罐中发酵诱导E.coli/pET-28a(+)-KR01重组工程菌 | 第67-68页 |
| 4.2.4 底物浓度对KR01催化效率的影响 | 第68页 |
| 4.2.5 pH对底物和产物稳定性的影响 | 第68页 |
| 4.2.6 产物检测方法 | 第68-69页 |
| 4.3 实验结果和分析 | 第69-76页 |
| 4.3.1 酶库中筛选催化2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮的羰基还原酶 | 第69-71页 |
| 4.3.2 KR01催化CFPO的反应条件优化 | 第71-72页 |
| 4.3.3 KR01催化CFPO合成(S)-CFPL百克级放大研究 | 第72-75页 |
| 4.3.4 KR01催化CFPO合成(S)-CFPL的催化反应吨位级放大 | 第75-76页 |
| 4.4 本章小结 | 第76-78页 |
| 全文总结 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 对进一步研究工作的设想和建议 | 第86-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文、专利申请 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 附录 | 第92-102页 |
