| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·基因治疗概述 | 第7-8页 |
| ·基因治疗策略 | 第7页 |
| ·基因治疗常用载体 | 第7-8页 |
| ·IL-24基因概述 | 第8-9页 |
| ·基因治疗用质粒DNA生产工艺的研究进展 | 第9-14页 |
| ·质粒DNA生产策略 | 第9页 |
| ·细胞裂解 | 第9-10页 |
| ·澄清和浓缩 | 第10页 |
| ·色谱纯化质粒的原理及应用特点 | 第10-12页 |
| ·重组质粒DNA质量监控标准的建立及要求 | 第12-14页 |
| ·本课题的来源及研究意义 | 第14-15页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第15-24页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第15-18页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·常用试剂配制 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-24页 |
| ·rh-IL-24工程菌的构建 | 第18页 |
| ·菌种传代稳定性的研究 | 第18-19页 |
| ·工程菌种子库的建立 | 第19页 |
| ·起始培养基的选择 | 第19-20页 |
| ·工程菌发酵培养 | 第20页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第20-21页 |
| ·裂解液澄清 | 第21页 |
| ·色谱纯化 | 第21页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第21-22页 |
| ·质粒DNA定量 | 第22页 |
| ·细菌内毒素检测 | 第22页 |
| ·杂质蛋白检测 | 第22页 |
| ·无菌试验 | 第22-23页 |
| ·残余抗生素检测 | 第23-24页 |
| 第三章 实验结果 | 第24-36页 |
| ·RH-IL-24工程菌的构建 | 第24-26页 |
| ·rh-IL-24工程菌的鉴定 | 第24页 |
| ·工程菌传代稳定性的研究 | 第24-25页 |
| ·基因测序结果 | 第25-26页 |
| ·质粒DNA发酵工艺的研究 | 第26-28页 |
| ·起始培养基的选择 | 第26-27页 |
| ·菌体发酵生长曲线的绘制 | 第27-28页 |
| ·发酵时间对质粒DNA浓度的影响 | 第28页 |
| ·质粒DNA的色谱纯化工艺 | 第28-31页 |
| ·DEAE Sepharose FF离子交换层析纯化质粒DNA | 第29-30页 |
| ·疏水层析纯化质粒DNA | 第30-31页 |
| ·Sepharose 4 FF分子筛层析纯化质粒DNA | 第31页 |
| ·两种质粒DNA纯化方法的比较 | 第31-36页 |
| ·质粒DNA浓度测定 | 第32页 |
| ·细菌内毒素含量测定 | 第32页 |
| ·残留RNA检测 | 第32-33页 |
| ·杂质蛋白含量检测 | 第33-34页 |
| ·无菌试验 | 第34页 |
| ·抗生素残留试验 | 第34-35页 |
| ·质粒DNA产品外观 | 第35-36页 |
| 第四章 讨论 | 第36-41页 |
| ·RH-IL-24工程菌构建及发酵生产的研究 | 第36-37页 |
| ·质粒DNA纯化工艺 | 第37-38页 |
| ·质粒DNA质量检测平台的建立 | 第38-39页 |
| ·两种纯化方法的比较 | 第39-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 附录1 英文缩写表 | 第46-47页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第47-48页 |