| 摘要 | 第2-3页 |
| abstract | 第3-4页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-40页 |
| 1.1 动物育种研究历史及现状 | 第12-16页 |
| 1.1.1 基于表型的表型值选种技术育种 | 第12-13页 |
| 1.1.2 基于育种值的育种研究 | 第13页 |
| 1.1.3 基于分子生物学的动物育种 | 第13-16页 |
| 1.2 DNA重组与修复 | 第16-22页 |
| 1.2.1 同源重组 | 第16-18页 |
| 1.2.2 DNA损伤修复途径 | 第18-22页 |
| 1.3 基因改造技术研究现状 | 第22-35页 |
| 1.3.1 基于胚胎基因改造的操作方法 | 第23-24页 |
| 1.3.2 基于细胞基因改造的操作方法 | 第24-27页 |
| 1.3.3 新型基因编辑技术 | 第27-35页 |
| 1.4 基因编辑技术在家畜育种上的应用及问题 | 第35-38页 |
| 1.4.1 应用 | 第35-37页 |
| 1.4.2 存在问题 | 第37-38页 |
| 1.5 本研究的目的意义、主要内容及创新点 | 第38-40页 |
| 1.5.1 研究目的与意义 | 第38-39页 |
| 1.5.2 创新点 | 第39-40页 |
| 2 奶牛胎儿成纤维细胞系的建立 | 第40-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第40页 |
| 2.1.1 实验设备 | 第40页 |
| 2.1.2 实验试剂耗材 | 第40页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第40页 |
| 2.2 实验内容与方法 | 第40-42页 |
| 2.2.1 奶牛胎儿成纤维细胞原代培养 | 第40-41页 |
| 2.2.2 细胞传代培养、细胞冻存与细胞复苏 | 第41页 |
| 2.2.3 细胞生长曲线测定 | 第41页 |
| 2.2.4 细胞染色体数目分析 | 第41-42页 |
| 2.3 实验结果 | 第42-44页 |
| 2.3.1 奶牛胎儿成纤维细胞原代培养 | 第42页 |
| 2.3.2 奶牛胎儿成纤维细胞传代培养及细胞复苏 | 第42-43页 |
| 2.3.3 奶牛胎儿成纤维细胞系生长曲线测定 | 第43-44页 |
| 2.3.4 奶牛胎儿成纤维细胞染色体数目分析 | 第44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-45页 |
| 2.5 小结 | 第45-46页 |
| 3 TALENs及LacS基因载体构建及活性验证 | 第46-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 实验设备 | 第46页 |
| 3.1.2 实验试剂及配制 | 第46-47页 |
| 3.2 实验内容及方法 | 第47-51页 |
| 3.2.1 TALEN靶位点选择及载体构建 | 第47-48页 |
| 3.2.2 TALEN活性验证 | 第48-50页 |
| 3.2.3 LacS基因载体构建 | 第50-51页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第51-56页 |
| 3.3.1 TALEN活性验证产物PCR条件摸索结果 | 第51-52页 |
| 3.3.2 TALEN质粒构建结果 | 第52-53页 |
| 3.3.3 TALEN活性检测结果 | 第53-54页 |
| 3.3.4 LacS基因载体构建结果 | 第54-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-57页 |
| 3.5 小结 | 第57-58页 |
| 4 细胞转染及单细胞筛选鉴定 | 第58-68页 |
| 4.1 实验材料 | 第58页 |
| 4.1.1 实验设备 | 第58页 |
| 4.1.2 实验试剂及配制 | 第58页 |
| 4.2 实验内容及方法 | 第58-61页 |
| 4.2.1 质粒准备 | 第58-60页 |
| 4.2.2 细胞转染条件摸索 | 第60页 |
| 4.2.3 TALENs及LacS基因载体共转染 | 第60页 |
| 4.2.4 单细胞培养与鉴定 | 第60-61页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第61-65页 |
| 4.3.1 LacS基因敲入策略 | 第61-62页 |
| 4.3.2 电转条件摸索结果 | 第62-63页 |
| 4.3.3 TALENs与LacS基因载体共转染结果 | 第63页 |
| 4.3.4 单细胞培养结果 | 第63-64页 |
| 4.3.5 单细胞株鉴定结果 | 第64-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-66页 |
| 4.5 小结 | 第66-68页 |
| 5 重构胚构建及胚胎移植 | 第68-79页 |
| 5.1 实验材料 | 第68-69页 |
| 5.1.1 实验设备 | 第68页 |
| 5.1.2 实验试剂及配制 | 第68-69页 |
| 5.1.3 实验材料 | 第69页 |
| 5.2 实验内容及方法 | 第69-71页 |
| 5.2.1 卵母细胞成熟培养 | 第69-70页 |
| 5.2.2 重构胚构建及体外培养 | 第70-71页 |
| 5.2.3 胚胎移植 | 第71页 |
| 5.2.4 受体牛妊娠检测 | 第71页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第71-77页 |
| 5.3.1 供体细胞培养 | 第71-72页 |
| 5.3.2 卵母细胞成熟培养结果 | 第72-73页 |
| 5.3.3 颗粒细胞培养 | 第73-74页 |
| 5.3.4 克隆胚构建及体外培养 | 第74页 |
| 5.3.5 胚胎移植受体牛检测结果 | 第74-77页 |
| 5.4 讨论 | 第77-78页 |
| 5.5 小结 | 第78-79页 |
| 6 全文结论 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-96页 |
| 附录 | 第96-102页 |
| 作者简介 | 第102页 |