| 摘要 | 第6-10页 |
| abstract | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第17-37页 |
| 1.1 中枢神经系统的概述 | 第17-21页 |
| 1.1.1 正常中枢神经系统的简介 | 第17-19页 |
| 1.1.2 中枢神经系统损伤的介绍 | 第19-21页 |
| 1.2 视神经再生的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.2.1 视神经损伤模型的构建 | 第21-22页 |
| 1.2.2 炎症与骨桥蛋白对视神经再生的研究 | 第22页 |
| 1.2.3 营养因子对视神经再生的研究 | 第22-23页 |
| 1.2.4 细胞固有抑制性因子对视神经再生的研究 | 第23-24页 |
| 1.2.5 细胞外在抑制性因子对视神经再生的研究 | 第24页 |
| 1.3 骨桥蛋白 | 第24-26页 |
| 1.4 IGF-1/IGFR信号轴 | 第26-29页 |
| 1.5 脂筏结构域在信号通路中作用 | 第29-34页 |
| 1.6 本研究的目的、方法、内容路线与意义 | 第34-37页 |
| 1.6.1 研究的目的 | 第34页 |
| 1.6.2 研究的方法 | 第34页 |
| 1.6.3 研究的内容路线 | 第34-36页 |
| 1.6.4 研究的意义 | 第36-37页 |
| 第二章 OPN协同IGF-1对视神经再生作用的鉴定 | 第37-62页 |
| 2.1 材料 | 第38-41页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第38页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第38页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第38-40页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第40页 |
| 2.1.5 主要仪器与设备 | 第40-41页 |
| 2.2 方法 | 第41-51页 |
| 2.2.1 AAV-fOPN、AAV-IGF-1质粒的构建与验证 | 第41-45页 |
| 2.2.2 腺相关病毒AAV的包装 | 第45-48页 |
| 2.2.3 OPN协同神经营养因子对小鼠视神经再生的手术流程与安排 | 第48-50页 |
| 2.2.4 小鼠组织固定与取材 | 第50页 |
| 2.2.5 小鼠视神经冰冻切片与化学发光 | 第50-51页 |
| 2.2.6 OPN协同不同剂量AAV-IGF-1或IGF-1蛋白作用于小鼠视神经损伤模型 | 第51页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第51页 |
| 2.3 结果 | 第51-59页 |
| 2.3.1 pAAV-CAG-fOPN和pAAV-CAG-IGF-1质粒的构建与验证 | 第51-55页 |
| 2.3.2 OPN协同神经营养因子对小鼠视神经再生的验证 | 第55-57页 |
| 2.3.3 OPN协同不同剂量AAV-IGF-1或rIGF-1对视神经再生的探究 | 第57-59页 |
| 2.4 讨论 | 第59-62页 |
| 第三章 OPN不同结构域协同IGF-1对视神经再生作用的探究 | 第62-80页 |
| 3.1 材料 | 第63页 |
| 3.1.1 质粒与菌株 | 第63页 |
| 3.1.2 实验动物 | 第63页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第63页 |
| 3.1.4 主要仪器与设备 | 第63页 |
| 3.1.5 相关网站 | 第63页 |
| 3.2 方法 | 第63-68页 |
| 3.2.1 OPN蛋白生物信息学分析 | 第63-64页 |
| 3.2.2 构建含有OPN短片段的质粒 | 第64-66页 |
| 3.2.3 针对不同OPN短片段的腺相关病毒包装 | 第66-67页 |
| 3.2.4 OPN/IGF重组蛋白作用于小鼠视神经损伤模型 | 第67-68页 |
| 3.2.5 含有OPN短片段的腺相关病毒作用于小鼠视神经损伤模型 | 第68页 |
| 3.2.6 统计学分析 | 第68页 |
| 3.3 结果 | 第68-76页 |
| 3.3.1 OPN蛋白生物信息学分析 | 第68-71页 |
| 3.3.2 OPN短片段质粒的构建 | 第71-73页 |
| 3.3.3 重组蛋白rOPN/rIGF-1促进小鼠中枢视神经再生 | 第73-75页 |
| 3.3.4 OPN通过整合素结合位点联合IGF-1促进轴突再生 | 第75-76页 |
| 3.4 讨论 | 第76-80页 |
| 第四章 OPN对于脂筏结构域IGFR信号通路作用的探究 | 第80-101页 |
| 4.1 材料 | 第81-85页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第81-82页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第82页 |
| 4.1.3 主要溶液配制 | 第82-84页 |
| 4.1.4 主要仪器与设备 | 第84-85页 |
| 4.2 方法 | 第85-91页 |
| 4.2.1 HEK293细胞的培养 | 第85页 |
| 4.2.2 皮层神经元的提取 | 第85-87页 |
| 4.2.3 重组蛋白OPN/IGF-1对IGFR/Akt信号通路表达的验证 | 第87-89页 |
| 4.2.4 重组蛋白OPN/IGF-1对IGFR信号通路在细胞脂筏上的表达验证 | 第89-90页 |
| 4.2.5 研究M-β-CD破坏细胞脂筏结构后对IGFR信号的表达水平的影响 | 第90页 |
| 4.2.6 探究M-β-CD对于重组蛋白OPN/IGF-1促进小鼠中枢视神经再生的影响 | 第90-91页 |
| 4.2.7 统计学分析 | 第91页 |
| 4.3 结果 | 第91-97页 |
| 4.3.1 HEK293细胞与小鼠皮层神经元的培养 | 第91-92页 |
| 4.3.2 OPN增强IGF-1所激活的IGF-1R/Akt信号通路的表达 | 第92-94页 |
| 4.3.3 OPN增强IGF-1R信号通路在脂筏结构域上表达 | 第94-95页 |
| 4.3.4 M-β-CD抑制OPN促进IGF-1R信号通路在脂筏结构域上表达 | 第95-96页 |
| 4.3.5 M-β-CD抑制OPN/IGF-1R联合促进中枢视神经再生的作用 | 第96-97页 |
| 4.4 讨论 | 第97-101页 |
| 第五章 OPN增强IGF-1激活的IGF-1R信号通路的机制探究 | 第101-118页 |
| 5.1 材料 | 第102-103页 |
| 5.1.1 细胞株 | 第102页 |
| 5.1.2 实验动物 | 第102页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第102页 |
| 5.1.4 主要仪器与设备 | 第102-103页 |
| 5.2 方法 | 第103-107页 |
| 5.2.1 免疫共沉淀检测整合素Integrin与IGFR结合的作用 | 第103-105页 |
| 5.2.2 免疫共沉淀检测M-β-CD对IGFR与整合素结合的影响 | 第105页 |
| 5.2.3 整合素抑制抗体对OPN/IGF-1诱导视神经再生的影响的检测 | 第105-106页 |
| 5.2.4 OPN调控脂筏上Caveolin-1与IGFR相互作用的验证 | 第106页 |
| 5.2.5 OPN/IGF-1作用下Caveolin-1磷酸化水平的检测 | 第106-107页 |
| 5.2.6 统计学分析 | 第107页 |
| 5.3 结果 | 第107-113页 |
| 5.3.1 OPN促进整合素转运至脂筏结构并结合IGFR受体 | 第107-109页 |
| 5.3.2 整合素抑制性抗体抑制了OPN/IGF-1对于中枢视神经再生的促进作用 | 第109-110页 |
| 5.3.3 OPN增强Caveolin-1与IGFR的相互作用 | 第110-112页 |
| 5.3.4 OPN调控IGF-1促进Caveolin-1磷酸化的效应 | 第112-113页 |
| 5.4 讨论 | 第113-118页 |
| 第六章 论文总结 | 第118-119页 |
| 6.1 主要结论 | 第118页 |
| 6.2 展望 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 发表的学术论文 | 第132页 |
