| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第14-26页 |
| 1.1 引言 | 第14-24页 |
| 1.1.1 东北虎研究现状 | 第14页 |
| 1.1.2 miR-302/367研究进展 | 第14-17页 |
| 1.1.3 CRISPR-dCas9研究进展 | 第17-22页 |
| 1.1.4 iPSCs研究进展 | 第22-24页 |
| 1.2 研究目标及研究内容 | 第24-26页 |
| 1.2.1 研究目标 | 第24页 |
| 1.2.2 研究内容 | 第24-26页 |
| 2 东北虎肺miRNA表达谱分析 | 第26-35页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 材料与方法 | 第26-27页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.2.2 实验主要仪器 | 第26页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第26页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第26-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-33页 |
| 2.3.1 东北虎肺总RNA完整性检测 | 第27页 |
| 2.3.2 测序质量评估 | 第27-28页 |
| 2.3.3 小RNA序列质量处理 | 第28-29页 |
| 2.3.4 序列长度分布 | 第29页 |
| 2.3.5 基因组比对 | 第29-30页 |
| 2.3.6 Small RNA的分类注释 | 第30页 |
| 2.3.7 东北虎肺miRNA表达谱的分析 | 第30-33页 |
| 2.4 本章讨论 | 第33-34页 |
| 2.5 本章小结 | 第34-35页 |
| 3 东北虎肺转录组分析 | 第35-47页 |
| 3.1 前言 | 第35页 |
| 3.2 材料与方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-45页 |
| 3.3.1 原始数据分析 | 第36-37页 |
| 3.3.2 东北虎肺Unigene功能注释 | 第37-38页 |
| 3.3.3 东北虎肺表达基因功能分析 | 第38-41页 |
| 3.3.4 东北虎肺基因pathway分析 | 第41-42页 |
| 3.3.5 东北虎肺miRNA表达谱与转录组关联分析 | 第42-45页 |
| 3.4 本章讨论 | 第45-46页 |
| 3.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 4 东北虎miR-302/367的内源性表达 | 第47-60页 |
| 4.1 前言 | 第47页 |
| 4.2 材料与方法 | 第47-52页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第47页 |
| 4.2.2 实验主要仪器 | 第47-48页 |
| 4.2.3 主要试剂 | 第48页 |
| 4.2.4 实验方法 | 第48-52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-58页 |
| 4.3.1 东北虎miR-302/367序列的获得 | 第52-53页 |
| 4.3.2 东北虎U6 snRNA的克隆 | 第53-54页 |
| 4.3.3 东北虎miR-302/367 sgRNA表达载体的构建 | 第54-56页 |
| 4.3.4 内源性miR-302/367表达 | 第56-58页 |
| 4.4 本章讨论 | 第58-59页 |
| 4.4.1 东北虎miR-302/367序列获得 | 第58页 |
| 4.4.2 内源性东北虎miR-302/367表达 | 第58-59页 |
| 4.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 5 重编程东北虎成纤维细胞为iPSCs | 第60-74页 |
| 5.1 前言 | 第60页 |
| 5.2 材料与方法 | 第60-64页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第60页 |
| 5.2.2 实验主要仪器 | 第60页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第60-61页 |
| 5.2.4 试剂的配制 | 第61页 |
| 5.2.5 实验方法 | 第61-64页 |
| 5.3 实验结果 | 第64-72页 |
| 5.3.1 miR-302/367重编程东北虎成纤维细胞为iPSCs | 第64-65页 |
| 5.3.2 东北虎iPSCs碱性磷酸酶染色 | 第65-66页 |
| 5.3.3 东北虎iPSCs EB的形成 | 第66页 |
| 5.3.4 东北虎iPSCs多能基因的免疫荧光检测 | 第66-68页 |
| 5.3.5 qRT-PCR检测iPSCs多能基因的表达 | 第68-69页 |
| 5.3.6 东北虎iPSCs核型分析 | 第69页 |
| 5.3.7 东北虎iPSCs多向诱导分化能力 | 第69-72页 |
| 5.4 本章讨论 | 第72-73页 |
| 5.5 本章小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-89页 |
| 附录 | 第89-134页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135-137页 |
| 附表 | 第137-138页 |
