| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 研究现状、成果 | 第14-15页 |
| 研究目的、方法 | 第15-17页 |
| 一、分析并验证Flag-GRSF1免疫共沉淀-深度测序复合体中富集的新的miRNAs | 第17-26页 |
| 1.1 材料和方法 | 第17-21页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 1.1.2 实验方法 | 第18-21页 |
| 1.1.3 统计学处理方法 | 第21页 |
| 1.2 结果 | 第21-24页 |
| 1.2.1 RIP实验提取的复合物中RNA的质量结果 | 第21-22页 |
| 1.2.2 热图分析RIP实验复合物高通量测序结果 | 第22页 |
| 1.2.3 在深度测序结果中分析新的miRNAs碱基序列分布 | 第22-23页 |
| 1.2.4 GO和KEGG软件分析高通量测序结果中新的miRNAs靶基因分布情况 | 第23-24页 |
| 1.3 讨论 | 第24-25页 |
| 1.4 小结 | 第25-26页 |
| 二、实验验证未知miRNAs的存在性及解析miR-G-1的表达 | 第26-38页 |
| 2.1 材料和方法 | 第26-33页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.1.3 统计学处理方法 | 第33页 |
| 2.2 结果 | 第33-36页 |
| 2.2.1 12个新的miRNAs在HeLa细胞中的分布 | 第33-34页 |
| 2.2.2 生物学软件结合测序结果预测miR-G-1的前体结果及成熟提序列 | 第34页 |
| 2.2.3 Northernblot验证miR-G-1的存在 | 第34页 |
| 2.2.4 HeLa和S12中检测miR-G-1-3p和miR-G-1-5p的表达水平 | 第34-35页 |
| 2.2.5 不同肿瘤细胞系中miR-G-1-5p的表达水平 | 第35页 |
| 2.2.6 宫颈癌患者的血清样本及组织样本中miR-G-1-5p的表达水平 | 第35-36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-37页 |
| 2.4 小结 | 第37-38页 |
| 三、miR-G-1作为促癌基因在宫颈癌细胞中发挥着重要作用 | 第38-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第38-52页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第39-52页 |
| 3.1.3 统计学处理方法 | 第52页 |
| 3.2 结果 | 第52-59页 |
| 3.2.1 过表达质粒pri-miR-G-1和敲降质粒Anti-miR-G-1的有效性 | 第52-53页 |
| 3.2.2 miR-G-1促进宫颈癌细胞的生长活性 | 第53页 |
| 3.2.3 miR-G-1促进HeLa和C33A细胞的集落形成能力 | 第53-54页 |
| 3.2.4 miR-G-1促进宫颈癌细胞的EdU嵌合率 | 第54-55页 |
| 3.2.5 miR-G-1促进宫颈癌细胞的周期进程 | 第55页 |
| 3.2.6 miR-G-1抑制了Hela和C33A细胞的细胞凋亡 | 第55-56页 |
| 3.2.7 miR-G-1抑制宫颈癌细胞的失巢凋亡 | 第56-57页 |
| 3.2.8 miR-G-1加快EMT过程 | 第57-58页 |
| 3.2.9 miR-G-1促进宫颈癌细胞的细胞核自噬行为 | 第58-59页 |
| 3.3 讨论 | 第59-60页 |
| 3.4 小结 | 第60-61页 |
| 四、miR-G-1靶基因的预测和确定 | 第61-72页 |
| 4.1 材料与方法 | 第61-65页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第61页 |
| 4.1.2 miR-G-1候选靶基因的筛选 | 第61-65页 |
| 4.1.3 统计学处理方法 | 第65页 |
| 4.2 结果 | 第65-70页 |
| 4.2.1 生物信息学软件预测miR-G-1的靶基因 | 第65-67页 |
| 4.2.2 荧光报告系统实验验证miR-G-1对预测候选靶基因的直接靶定作用 | 第67页 |
| 4.2.3 荧光报告载体的Westernblot实验验证TMED5和LMNB1是miR-G-1的直接靶基因 | 第67-68页 |
| 4.2.4 miR-G-1上调LMNB1和TMED5 mRNA的表达水平 | 第68-69页 |
| 4.2.5 miR-G-1上调靶基因LMNB1和TMED5蛋白的表达 | 第69页 |
| 4.2.6 miR-G-1在体内能促进LMNB1和TMED5的表达 | 第69-70页 |
| 4.3 讨论 | 第70-71页 |
| 4.4 小结 | 第71-72页 |
| 五、TMED5在宫颈癌细胞中所起的作用 | 第72-81页 |
| 5.1 实验材料与实验方法 | 第72-74页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第72页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第72-74页 |
| 5.1.3 统计学处理方法 | 第74页 |
| 5.2 结果 | 第74-80页 |
| 5.2.1 pTMED5和shR-TMED5质粒的有效性验证 | 第74-75页 |
| 5.2.2 TMED5对HeLa和C33A细胞生长活性的影响 | 第75-76页 |
| 5.2.3 TMED5对HeLa和C33A细胞增殖能力的影响 | 第76-77页 |
| 5.2.4 TMED5促进HeLa和C33A细胞周期G1期向S/G2期的转换 | 第77-78页 |
| 5.2.5 TMED5抑制HeLa和C33A细胞的凋亡 | 第78页 |
| 5.2.6 TMED5促进宫颈癌细胞的迁移侵袭能力… | 第78-79页 |
| 5.2.7 TMED5促进HeLa细胞的上皮-间质转化过程 | 第79-80页 |
| 5.2.8 TMED5的表达量与宫颈癌患者的恶性程度相关 | 第80页 |
| 5.3 讨论 | 第80页 |
| 5.4 小结 | 第80-81页 |
| 六、TMED5和WNT7B相互作用调控WNT信号通路 | 第81-90页 |
| 6.1 材料与方法 | 第81-83页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第81-82页 |
| 6.1.2 实验方法 | 第82-83页 |
| 6.2 实验结果 | 第83-88页 |
| 6.2.1 STRING预测TMED5的相互作用蛋白 | 第83页 |
| 6.2.2 免疫荧光实验分析TMED5和WNT7B在细胞内的分布情况 | 第83-84页 |
| 6.2.3 免疫共沉淀实验验证TMED5和WNT7B的相互作用 | 第84页 |
| 6.2.4 TMED5能够促进WNT7B的表达 | 第84-85页 |
| 6.2.5 免疫荧光实验检测β-catenin的分布及表达量 | 第85-86页 |
| 6.2.6 TMED5对WNT信号通路相关蛋白的影响 | 第86-87页 |
| 6.2.7 TMED5对TOP/FOP报告系统活性的影响 | 第87-88页 |
| 6.3 讨论 | 第88-89页 |
| 6.4 小结 | 第89-90页 |
| 七.miR-G-1通过LMNB1调控宫颈癌细胞的核自噬行为进而影响了DNA损伤复 | 第90-97页 |
| 7.1 材料与方法 | 第90-93页 |
| 7.1.1 实验材料 | 第90-91页 |
| 7.1.2 实验方法 | 第91-92页 |
| 7.1.3 统计学处理方法实验 | 第92-93页 |
| 7.2 结果 | 第93-95页 |
| 7.2.1 免疫荧光检测LMNB1对HeLa细胞核自噬行为的影响 | 第93页 |
| 7.2.2 Westernblot实验检测LMNB1对自噬相关蛋白的影响 | 第93-94页 |
| 7.2.3 LMNB1对DNA损伤修复相关基因的影响 | 第94-95页 |
| 7.3 讨论 | 第95-96页 |
| 7.4 小结 | 第96-97页 |
| 八.GRSF1介导miR-G-1上调其靶基因TMED5和LMNB1 | 第97-105页 |
| 8.1 材料与方法 | 第97-100页 |
| 8.1.2 实验方法 | 第98-100页 |
| 8.2 实验结果 | 第100-103页 |
| 8.2.1 GRSF1介导miR-G-1上调TMED5和LMNB1 | 第100页 |
| 8.2.2 shR-GRSF1在HeLa细胞的敲降效率 | 第100-101页 |
| 8.2.3 敲降GRSF1的HeLa细胞中荧光报告基因系统中EGFP的表达….…. | 第101页 |
| 8.2.4 我们构建并验证GRSF1的4个分片段的有效性 | 第101-102页 |
| 8.2.5 EMSA检测GRSF1与miR-G-1的结合 | 第102页 |
| 8.2.6 EMSA检测GRSF1的4个分片段与miR-G-1的结合 | 第102-103页 |
| 8.3 讨论 | 第103-104页 |
| 8.4 小结 | 第104-105页 |
| 全文结论 | 第105-106页 |
| 本文创新点 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-116页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第116-118页 |
| 综述 非编码小RNA调控其靶基因表达的分子机制及自噬行为的研究进展 | 第118-135页 |
| 综述参考文献 | 第125-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 个人简历 | 第136页 |
