| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-26页 |
| 1.1 结核病 | 第10-15页 |
| 1.1.1 结核病简介及现状 | 第10-11页 |
| 1.1.2 结核分枝杆菌病原特性 | 第11页 |
| 1.1.3 结核病的发病机制 | 第11-12页 |
| 1.1.4 结核分枝杆菌与巨噬细胞的互作 | 第12-13页 |
| 1.1.5 结核分枝杆菌的致病性 | 第13-14页 |
| 1.1.6 与结核分枝杆菌毒力有关的一些抗原 | 第14-15页 |
| 1.2 蛋白互作组学及主要研究手段 | 第15-17页 |
| 1.2.1 串联亲和层析简介 | 第15-17页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9基因编辑系统 | 第17-19页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9概述 | 第17-18页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9技术的应用 | 第18-19页 |
| 1.4 结核病诊断 | 第19-26页 |
| 1.4.1 结核病的诊断技术研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4.2 结核病的临床诊断 | 第20页 |
| 1.4.3 结核病的实验室诊断方法 | 第20-26页 |
| 1.4.3.1 细菌学检查 | 第20页 |
| 1.4.3.2 病理学检查 | 第20页 |
| 1.4.3.3 免疫学检查 | 第20-21页 |
| 1.4.3.4 分子生物学检测方法 | 第21-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-30页 |
| 2.1.1 细胞系,菌株,质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 主要药品与试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要培养基、抗生素及其配置 | 第27-28页 |
| 2.1.4 缓冲液及其配置 | 第28-29页 |
| 2.1.5 主要的生物学分子软件 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-42页 |
| 2.2.1 常规分子克隆实验 | 第30-35页 |
| 2.2.1.1 PCR反应体系 | 第30-31页 |
| 2.2.1.2 PCR产物的电泳检测 | 第31页 |
| 2.2.1.3 DNA切胶回收的方法 | 第31页 |
| 2.2.1.4 DNA直接纯化分离的方法 | 第31-32页 |
| 2.2.1.5 限制性内切酶酶切反应 | 第32页 |
| 2.2.1.6 外源DNA片段与载体通过连接酶连接 | 第32-33页 |
| 2.2.1.7 外源DNA片段与载体通过同源重组的方式连接 | 第33页 |
| 2.2.1.8 连接产物的转化 | 第33页 |
| 2.2.1.9 阳性重组克隆的筛选和鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2.2 稳定表达分泌蛋白Raw264.7细胞系的构建 | 第35-37页 |
| 2.2.2.1 G418筛选浓度及维持浓度的确定 | 第35页 |
| 2.2.2.2 细胞的转染及后期筛选 | 第35页 |
| 2.2.2.3 间接免疫荧光鉴定目的蛋白的表达 | 第35-36页 |
| 2.2.2.4 WesternBlot实验检验目的蛋白表达量 | 第36-37页 |
| 2.2.3 串联亲和纯化(TandemAffinityPurification) | 第37-38页 |
| 2.2.4 银染 | 第38-39页 |
| 2.2.5 结核分枝杆菌环介导等温扩增实验检测方法的建立 | 第39-42页 |
| 2.2.5.1 引物的设计与筛选 | 第39-40页 |
| 2.2.5.2 结核分枝杆菌LAMP方法的建立 | 第40页 |
| 2.2.5.3 结核分枝杆菌MDA-PCR方法的建立 | 第40-41页 |
| 2.2.5.4 HCR检测结核分枝杆菌的方法建立 | 第41-42页 |
| 2.3 实验用引物 | 第42-44页 |
| 第三章 实验结果 | 第44-61页 |
| 3.1 ESAT6/CFP10/Ag85B/HspX/MPT64重组表达质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.2 稳定表达ESAT6/CFP10/Ag85B/HspX/MPT64的Raw264.7细胞系的构建及鉴定 | 第45-53页 |
| 3.2.1 G418工作浓度的筛选 | 第45-46页 |
| 3.2.2 稳定表达分泌蛋白的Raw264.7细胞系的构建 | 第46-48页 |
| 3.2.3 间接免疫荧光鉴定改造后细胞系目的蛋白的表达 | 第48-50页 |
| 3.2.4 流式细胞仪筛选阳性细胞 | 第50-51页 |
| 3.2.5 检测重组片段成功插入Raw264.7基因组Hipp11位点 | 第51-52页 |
| 3.2.6 WesternBlot检测稳定表达分泌蛋白的细胞系的蛋白表达 | 第52-53页 |
| 3.3 串联亲和层析方法筛选与ESAT6或MPT64互作的宿主蛋白 | 第53-56页 |
| 3.4 TB-LAMP检测结核分枝杆菌H37Ra的方法的建立 | 第56-57页 |
| 3.4.1 LAMP方法阳性质粒的构建 | 第56页 |
| 3.4.2 LAMP检测结核分枝杆菌H37Ra实验的建立 | 第56-57页 |
| 3.5 MDA-PCR方法检测结核分枝杆菌H37Ra的实验的建立 | 第57-59页 |
| 3.6 HCR鉴定结核分枝杆菌的方法建立 | 第59-61页 |
| 第四章 讨论 | 第61-64页 |
| 4.1 筛选与结核分枝杆菌分泌蛋白互作的宿主蛋白 | 第61-62页 |
| 4.2 结核分枝杆菌H37Ra检测方法的初步建立 | 第62-64页 |
| 第五章 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
