| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语索引 | 第16-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-24页 |
| 1.1 戊型肝炎的流行及危害 | 第18-19页 |
| 1.2 戊型肝炎病毒感染孕妇的研究现状 | 第19-21页 |
| 1.2.1 戊型肝炎病毒感染孕妇的流行与危害 | 第19-20页 |
| 1.2.2 戊型肝炎病毒感染对孕妇和胎儿的影响 | 第20-21页 |
| 1.3 妊娠期激素对病毒复制的影响 | 第21页 |
| 1.4 戊型肝炎病毒感染与宿主免疫应答 | 第21-23页 |
| 1.4.1 妊娠期Th1/Th2型免疫应答 | 第21-22页 |
| 1.4.2 HEV与Th1/Th2型免疫应答 | 第22-23页 |
| 1.5 本文的研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 不同血清对HEV复制的影响 | 第24-43页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验方案 | 第24页 |
| 2.3 实验材料 | 第24-31页 |
| 2.3.1 实验用血清样本及HEV毒种 | 第24-25页 |
| 2.3.2 实验细胞及扩增引物 | 第25页 |
| 2.3.3 主要药品及试剂 | 第25-27页 |
| 2.3.4 试剂配制 | 第27-30页 |
| 2.3.5 主要仪器设备及耗材 | 第30-31页 |
| 2.4 实验方法 | 第31-37页 |
| 2.4.1 A549细胞培养 | 第31-32页 |
| 2.4.2 血清的制备 | 第32页 |
| 2.4.3 HEV的体外培养 | 第32页 |
| 2.4.4 病毒接种与感染过程 | 第32-33页 |
| 2.4.5 病毒RT-nPCR检测 | 第33-34页 |
| 2.4.6 雌激素的测定 | 第34-35页 |
| 2.4.7 孕激素的测定 | 第35页 |
| 2.4.8 MTT法检测细胞活性 | 第35-36页 |
| 2.4.9 细胞蛋白提取 | 第36页 |
| 2.4.10 蛋白免疫印迹 | 第36-37页 |
| 2.5 结果 | 第37-40页 |
| 2.5.1 添加不同血清对HEV复制的影响 | 第37-38页 |
| 2.5.2 不同孕期血清雌激素、孕激素测定 | 第38-40页 |
| 2.5.3 不同血清对细胞增殖的影响 | 第40页 |
| 2.6 讨论 | 第40-41页 |
| 2.6.1 孕妇晚期血清可促进HEV病毒的复制 | 第40-41页 |
| 2.6.2 孕妇血清雌激素和孕激素水平升高 | 第41页 |
| 2.7 本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 雌激素对HEV复制的影响 | 第43-62页 |
| 3.1 引言 | 第43-44页 |
| 3.2 实验方案 | 第44页 |
| 3.3 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.3.1 扩增引物 | 第44页 |
| 3.3.2 主要试剂及药品 | 第44-45页 |
| 3.3.3 溶液配制 | 第45页 |
| 3.4 方法 | 第45-50页 |
| 3.4.1 临床样本雌激素检测 | 第45页 |
| 3.4.2 临床样本雌激素受体检测 | 第45-47页 |
| 3.4.3 雌激素对病毒复制的影响 | 第47页 |
| 3.4.4 HEV感染对雌激素受体表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.5 共聚焦显微镜共定位ER-α与HEV | 第48页 |
| 3.4.6 Fulvestrant拮抗雌激素受体接种HEV对Ras/Raf/MEK通路的影响 | 第48页 |
| 3.4.7 抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对HEV复制的影响 | 第48-50页 |
| 3.5 结果 | 第50-59页 |
| 3.5.1 临床样本雌激素检测以及雌激素受体检测 | 第50-51页 |
| 3.5.2 雌激素可促进HEV复制 | 第51-52页 |
| 3.5.3 HEV复制抑制雌激素受体表达 | 第52-53页 |
| 3.5.4 ER-α与HEV有相互作用 | 第53-54页 |
| 3.5.5 A549细胞添加Fulvestrant并感染HEV对Ras/Raf/MEK通路的影响 | 第54-55页 |
| 3.5.6 PI3K抑制剂LY294002对HEV复制的影响 | 第55-57页 |
| 3.5.7 mTOR抑制剂Rapamycin对HEV复制的影响 | 第57-59页 |
| 3.6 讨论 | 第59-61页 |
| 3.6.1 雌激素促进HEV复制 | 第59-60页 |
| 3.6.2 雌激素受体在HEV感染过程中作用机制 | 第60页 |
| 3.6.3 HEV感染对宿主PI3K/Akt/mTOR的影响 | 第60-61页 |
| 3.7 本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 孕激素对HEV复制的影响 | 第62-68页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 实验方案 | 第62-63页 |
| 4.3 实验材料 | 第63页 |
| 4.3.1 扩增引物 | 第63页 |
| 4.3.2 主要试剂及药品 | 第63页 |
| 4.3.3 溶液配制 | 第63页 |
| 4.4 实验方法 | 第63-65页 |
| 4.4.1 临床样本孕激素检测 | 第63页 |
| 4.4.2 临床样本孕激素受体基因突变体检测 | 第63-64页 |
| 4.4.3 孕激素对病毒复制的影响 | 第64-65页 |
| 4.5 实验结果 | 第65-67页 |
| 4.5.1 临床样本孕激素以及孕激素受体基因突变体检测 | 第65-66页 |
| 4.5.2 孕激素促进HEV复制 | 第66-67页 |
| 4.6 讨论 | 第67页 |
| 4.7 本章小结 | 第67-68页 |
| 第五章 HEV感染对孕鼠妊娠的影响 | 第68-82页 |
| 5.1 引言 | 第68页 |
| 5.2 实验方案 | 第68-69页 |
| 5.3 实验材料 | 第69页 |
| 5.3.1 扩增引物 | 第69页 |
| 5.3.2 主要试剂及药品 | 第69页 |
| 5.4 实验方法 | 第69-72页 |
| 5.4.1 Balb/C小鼠模型的制备与分组 | 第69页 |
| 5.4.2 孕鼠肝组织研磨液Real-Time qPCR检测HEV | 第69-70页 |
| 5.4.3 孕鼠血清样本雌激素、孕激素检测 | 第70页 |
| 5.4.4 孕鼠子宫ER-α表达情况检测 | 第70页 |
| 5.4.5 血清样本IL-12(Th1型)、IL-10(Th2型)检测 | 第70-72页 |
| 5.4.6 Real-Time qPCR检测HEV对A549细胞产生Ⅰ型干扰素的影响 | 第72页 |
| 5.5 实验结果 | 第72-79页 |
| 5.5.1 Balb/C小鼠模型分组及HEV对孕鼠妊娠结局影响 | 第72-73页 |
| 5.5.2 孕鼠肝组织研磨液检测HEV RNA | 第73-74页 |
| 5.5.3 孕鼠血清样本雌激素、孕激素检测 | 第74-75页 |
| 5.5.4 HEV感染抑制孕鼠子宫ER-α表达 | 第75页 |
| 5.5.5 血清样本IL-12(Th1型)、IL-10(Th2型)检测 | 第75-78页 |
| 5.5.6 HEV感染对宿主细胞Ⅰ型干扰素产生的影响 | 第78-79页 |
| 5.6 讨论 | 第79-81页 |
| 5.6.1 HEV感染对孕鼠的影响 | 第79页 |
| 5.6.2 HEV感染与免疫应答 | 第79-81页 |
| 5.7 本章小结 | 第81-82页 |
| 第六章 全文总结 | 第82-83页 |
| 第七章 展望 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 附录 攻读硕士期间发表论文及参与项目目录 | 第91页 |
