| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明表 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 实验材料和实验方法 | 第15-39页 |
| 实验材料 | 第15-18页 |
| 1.1 实验用小鼠 | 第15页 |
| 1.2 使用的菌株 | 第15页 |
| 1.3 使用的细胞系 | 第15页 |
| 1.4 使用的质粒载体 | 第15-16页 |
| 1.5 主要生化材料、试剂盒 | 第16-17页 |
| 1.6 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 实验方法 | 第18-39页 |
| 第一部分 常用实验方法 | 第18-30页 |
| 1、感受态细菌的制备(CaCl_2法) | 第18页 |
| 2、质粒转化 | 第18-19页 |
| 3、质粒的小量制备 | 第19页 |
| 4、DNA的纯化回收 | 第19-20页 |
| 5、RNA的提取 | 第20页 |
| 6、RNA逆转录为cDNA | 第20-21页 |
| 7、PCR鉴定 | 第21页 |
| 8、PCR法构建重组质粒 | 第21-22页 |
| 9、原核蛋白表达 | 第22-23页 |
| 10、融合蛋白初步分离 | 第23页 |
| 11、表达蛋白纯化 | 第23-24页 |
| 12、免疫小鼠多克隆抗体的制备 | 第24页 |
| 13、ELISA法检测多克隆抗体滴度 | 第24-25页 |
| 14、聚丙烯酸胺凝胶电泳((SDS-PAGE)及Western Blot | 第25-27页 |
| 15、蛋白的提取 | 第27页 |
| 16、蛋白浓度测定 | 第27-28页 |
| 17、组织蜡块的制作 | 第28页 |
| 18、组织切片HE染色 | 第28-29页 |
| 19、免疫荧光化学法 | 第29-30页 |
| 第二部分 Stra8表达研究相关实验方法 | 第30-39页 |
| 1、目的基因过表达Stra8慢病毒载体构建及慢病毒的包装 | 第30-34页 |
| 2、稳定表达Stra8小鼠精原细胞系GC1-spg的鉴定 | 第34-38页 |
| 3、动物模型的构建 | 第38-39页 |
| 结果 | 第39-68页 |
| 一、制备Stra8多克隆抗体和检测Stra8在小鼠睾丸中的表达 | 第39-42页 |
| 1、Stra8原核蛋白的表达 | 第39-41页 |
| 1.1 Stra8原核表达载体的构建 | 第39页 |
| 1.2 Stra8原核表达蛋白的诱导 | 第39-40页 |
| 1.3 Str8融合蛋白的分离和纯化 | 第40-41页 |
| 2、Stra8多克隆抗体的制备 | 第41-42页 |
| 2.1 免疫小鼠获得多克隆抗体 | 第41页 |
| 2.2 Western blot检测抗体 | 第41页 |
| 2.3 免疫荧光化学检测抗体 | 第41-42页 |
| 二、Stra8过表达小鼠精原细胞株的构建 | 第42-51页 |
| 1 慢病毒载体的构建 | 第42-47页 |
| 1.1 慢病毒载体线性化 | 第42-43页 |
| 1.2 PCR扩增目的片段 | 第43-44页 |
| 1.3 阳性克隆的PCR鉴定 | 第44页 |
| 1.4 阳性克隆测序结果及结果分析 | 第44-47页 |
| 2 慢病毒重组质粒的表达鉴定 | 第47-49页 |
| 3 Stra8过表达小鼠精原细胞株的构建和鉴定 | 第49-51页 |
| 3.1 RT-PCR检测不同细胞系中Stra8 mRNA的表达 | 第49页 |
| 3.2 Western blot鉴定Stra8过表达小鼠精原细胞株 | 第49-50页 |
| 3.3 细胞免疫荧光检测Stra8过表达小鼠精原细胞株 | 第50-51页 |
| 三、VAD及VAD恢复小鼠中Stra8的表达研究 | 第51-68页 |
| 1 VAD小鼠及VAD恢复小鼠的构建与鉴定 | 第51-59页 |
| 1.1 正常小鼠、VAD小鼠及VAD恢复小鼠睾丸体积、产仔数比较 | 第51-52页 |
| 1.2 HE染色法对VAD及VAD恢复小鼠睾丸组织进行形态学分析 | 第52-59页 |
| 2 Stra8在VAD及VAD恢复模型小鼠睾丸中的表达分析 | 第59-68页 |
| 2.1 Western blot检测两种模型小鼠睾丸中Stra8的表达 | 第59-61页 |
| 2.2 免疫荧光化学法检测VAD及VAD恢复模型小鼠睾丸中Stra8的表达 | 第61-68页 |
| 讨论 | 第68-70页 |
| 小结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 文献综述(一) | 第73-79页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 文献综述(二) | 第79-89页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读学位期间完成论文 | 第90-91页 |
