| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 1 引言 | 第11-18页 |
| 1.1 蒙古冰草及研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2 植物miRNA概况 | 第12-17页 |
| 1.2.1 miRNA的发现 | 第12页 |
| 1.2.2 miRNA的命名 | 第12页 |
| 1.2.3 植物miRNA的产生和作用机制 | 第12-13页 |
| 1.2.4 植物miRNA的特点 | 第13-14页 |
| 1.2.5 植物miRNA的靶基因 | 第14页 |
| 1.2.6 植物miRNA的干旱胁迫响应 | 第14-17页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-28页 |
| 2.1 试验材料与试剂 | 第18页 |
| 2.1.1 试验材料及载体菌种 | 第18页 |
| 2.1.2 试验试剂及配方 | 第18页 |
| 2.2 蒙古冰草植株的培养及取样 | 第18-19页 |
| 2.3 蒙古冰草总RNA的提取 | 第19页 |
| 2.4 干旱胁迫下蒙古冰草smallRNA文库构建及Solexa高通量测序 | 第19-21页 |
| 2.4.1 文库构建及测序 | 第19-20页 |
| 2.4.2 信息分析流程 | 第20-21页 |
| 2.5 蒙古冰草7个抗旱相关新预测miRNA的实时荧光定量PCR验证 | 第21-23页 |
| 2.5.1 引物设计 | 第21-22页 |
| 2.5.2 miRNA反转录 | 第22页 |
| 2.5.3 实时荧光定量PCR | 第22-23页 |
| 2.6 蒙古冰草7个抗旱相关miRNA靶基因预测及生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.7 蒙古冰草7个miRNA基因的克隆及植物表达载体的构建 | 第23-26页 |
| 2.7.1 蒙古冰草总RNA的反转录 | 第23-24页 |
| 2.7.2 PCR引物设计 | 第24页 |
| 2.7.3 miRNA目的片段的扩增 | 第24-25页 |
| 2.7.4 表达载体的获得 | 第25页 |
| 2.7.5 表达载体和目的片段的双酶切 | 第25页 |
| 2.7.6 目的片段与载体的连接 | 第25-26页 |
| 2.7.7 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.7.8 连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第26页 |
| 2.8 农杆菌介导拟南芥遗传转化 | 第26-27页 |
| 2.8.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| 2.8.2 阳性克隆转化农杆菌感受态细胞 | 第26-27页 |
| 2.8.3 侵染拟南芥花序介导转化 | 第27页 |
| 2.9 转基因拟南芥植株的筛选 | 第27-28页 |
| 2.9.1 转基因拟南芥植株的干旱处理及表型观测 | 第27页 |
| 2.9.2 转基因拟南芥植株的PCR及实时荧光定量PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-50页 |
| 3.1 干旱胁迫下蒙古冰草smallRNA文库构建及Solexa高通量测序 | 第28-29页 |
| 3.1.1 测序结果统计 | 第28页 |
| 3.1.2 sRNA注释 | 第28-29页 |
| 3.1.3 公共及特有序列分析 | 第29页 |
| 3.2 蒙古冰草抗旱相关miRNA的筛选及其靶基因预测 | 第29-36页 |
| 3.2.1 基于长度分布的miRNA筛选 | 第29-31页 |
| 3.2.2 基于miRNA成熟序列的碱基偏好性筛选 | 第31-32页 |
| 3.2.3 基于miRBase20数据库的miRNA筛选 | 第32页 |
| 3.2.4 差异表达miRNA分析 | 第32-34页 |
| 3.2.5 靶基因预测及功能注释 | 第34页 |
| 3.2.6 差异表达miRNA靶基因的注释 | 第34-36页 |
| 3.3 蒙古冰草7个抗旱相关miRNA的实时荧光定量PCR验证 | 第36-39页 |
| 3.3.1 蒙古冰草总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 3.3.2 蒙古冰草抗旱相关的7个新预测miRNA的真实性检测 | 第37页 |
| 3.3.3 蒙古冰草抗旱相关的7个新预测miRNA的表达分析 | 第37-39页 |
| 3.4 蒙古冰草抗旱相关的7个新预测miRNA的靶基因预测 | 第39-43页 |
| 3.5 成功构建蒙古冰草7个抗旱相关miRNA的表达载体 | 第43-46页 |
| 3.5.1 蒙古冰草7个miRNA基因的克隆 | 第43-44页 |
| 3.5.2 pBI121表达载体的获得 | 第44页 |
| 3.5.3 菌落PCR验证 | 第44-45页 |
| 3.5.4 植物表达载体构建 | 第45-46页 |
| 3.6 农杆菌介导遗传转化和转基因拟南芥植株检测 | 第46-50页 |
| 3.6.1 不同miRNA转基因拟南芥植株的筛选 | 第46页 |
| 3.6.2 转基因拟南芥植株的表型分析 | 第46-47页 |
| 3.6.3 转基因拟南芥植株的PCR检测 | 第47-48页 |
| 3.6.4 转基因拟南芥植株的qRT-PCR检测 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 4.1 蒙古冰草差异表达的miRNA筛选 | 第50页 |
| 4.2 蒙古冰草miRNA的qRT-PCR验证以及靶基因预测 | 第50-51页 |
| 4.3 蒙古冰草miRNA表达载体的构建 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 附录 | 第63-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
