嗜水气单胞菌毒力基因检测及其在锦鲤组织中的分布研究
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 分类地位与形态特征 | 第10页 |
| 1.2 致病性与毒力因子 | 第10-13页 |
| 1.2.1 致病性 | 第10页 |
| 1.2.2 毒力因子 | 第10-12页 |
| 1.2.3 毒力因子的不稳定性 | 第12-13页 |
| 1.2.4 致病机理 | 第13页 |
| 1.3 检测与诊断技术 | 第13-15页 |
| 1.3.1 生化鉴定 | 第13页 |
| 1.3.2 免疫鉴定 | 第13-14页 |
| 1.3.3 分子生物学技术鉴定 | 第14-15页 |
| 1.4 防治方法 | 第15-16页 |
| 1.4.1 抗生素防治 | 第15页 |
| 1.4.2 中草药防治 | 第15-16页 |
| 1.4.3 疫苗防治 | 第16页 |
| 1.4.4 益生菌防治 | 第16页 |
| 1.5 原位杂交技术 | 第16-17页 |
| 1.6 原位杂交的三要素 | 第17-19页 |
| 1.6.1 组织、细胞或染色体的固定剂 | 第17页 |
| 1.6.2 探针的类型及长度 | 第17-18页 |
| 1.6.3 探针标记物的种类 | 第18-19页 |
| 1.7 原位杂交技术在水产养殖中的应用 | 第19-20页 |
| 1.7.1 基因定位 | 第19页 |
| 1.7.2 疾病检测及诊断 | 第19-20页 |
| 1.8 本论文研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 供试菌株的毒力基因检测 | 第21-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 试验菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 培养基的配制 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第22页 |
| 2.2.2 供试菌株DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.3 PCR检测气溶素毒力基因 | 第23页 |
| 2.2.4 电泳检测及胶回收 | 第23页 |
| 2.2.5 目的片段的连接 | 第23页 |
| 2.2.6 转化 | 第23-24页 |
| 2.2.7 目的片段的检测 | 第24页 |
| 2.2.8 序列分析 | 第24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-28页 |
| 2.3.1 试验菌株DNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.3.2 PCR检测气溶素毒力基因 | 第25-26页 |
| 2.3.3 PCR产物的纯化 | 第26页 |
| 2.3.4 提取和检测连接有目的片段的质粒 | 第26-28页 |
| 2.3.5 序列分析 | 第28页 |
| 2.3.6 序列比对 | 第28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 3 嗜水气单胞菌对锦鲤的人工感染 | 第30-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 试验菌种 | 第30页 |
| 3.1.2 试验鱼 | 第30页 |
| 3.1.3 主要仪器设备与试剂 | 第30-31页 |
| 3.1.4 培养基的配制 | 第31页 |
| 3.2 试验方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1 人工感染试验 | 第31-32页 |
| 3.2.2 病原菌的分离纯化 | 第32页 |
| 3.2.3 分离菌的特性鉴定 | 第32页 |
| 3.2.4 16SrDNA鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.5 PCR反应产物电泳、回收和测序 | 第33页 |
| 3.2.6 菌株的保存 | 第33-34页 |
| 3.2.7 药敏试验 | 第34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-40页 |
| 3.3.1 人工感染的嗜水气单胞菌锦鲤症状 | 第34-36页 |
| 3.3.2 病原菌的分离 | 第36页 |
| 3.3.3 菌落形态特征 | 第36-37页 |
| 3.3.4 革兰氏染色 | 第37-38页 |
| 3.3.5 扫描电镜观察结果 | 第38页 |
| 3.3.6 生理生化鉴定结果 | 第38-39页 |
| 3.3.7 分子生物学鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.8 药敏试验 | 第40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-42页 |
| 4 嗜水气单胞菌在锦鲤组织中的分布研究 | 第42-53页 |
| 4.1 材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 试验用鱼 | 第42页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第43页 |
| 4.2 方法 | 第43-46页 |
| 4.2.1 探针的制备 | 第43-44页 |
| 4.2.2 斑点杂交试验 | 第44-45页 |
| 4.2.3 切片的制备 | 第45页 |
| 4.2.4 切片的预处理 | 第45-46页 |
| 4.2.5 原位杂交 | 第46页 |
| 4.2.6 原位杂交信号显色 | 第46页 |
| 4.2.7 结果的判定 | 第46页 |
| 4.3 实验结果 | 第46-52页 |
| 4.3.1 探针的制备 | 第46-47页 |
| 4.3.2 探针敏感性的测定 | 第47-48页 |
| 4.3.3 探针特异性的检测 | 第48页 |
| 4.3.4 病原菌的组织分布 | 第48-52页 |
| 4.3.5 病原菌的组织感染统计 | 第52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
