| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词 | 第16-17页 |
| 第一部分 人类p53突变蛋白p53S(p53N239S)的表达与纯化 | 第17-57页 |
| 第一章 绪论 | 第17-23页 |
| 1.1 肿瘤与基因突变 | 第17-18页 |
| 1.2 p53与p53S | 第18-22页 |
| 1.2.1 p53结构初探 | 第18-20页 |
| 1.2.2 p53S功能初探 | 第20-22页 |
| 1.3 本研究的主要内容及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.1.1 试剂配制 | 第23-27页 |
| 2.1.2 试剂信息 | 第27-28页 |
| 2.1.3 实验器材及仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-45页 |
| 2.2.1 pEASY-T1-p53质粒的构建 | 第29-33页 |
| 2.2.1.1 人的野生型细胞总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 RT-PCR反转录cDNA | 第30-31页 |
| 2.2.1.3 利用PCR扩增野生型p53片段 | 第31-32页 |
| 2.2.1.4 连接 | 第32页 |
| 2.2.1.5 转化大肠杆菌XL-10 | 第32页 |
| 2.2.1.6 小提pEASY-T1-p53质粒 | 第32-33页 |
| 2.2.2 定点突变,构建pEASY-T1-p53S载体 | 第33-35页 |
| 2.2.2.1 引物设计 | 第33-34页 |
| 2.2.2.2 定点突变PCR,构建pEASY-T1-p53S载体 | 第34-35页 |
| 2.2.2.3 小提pEASY-T1-p53S质粒和pGEX-4T-1质粒 | 第35页 |
| 2.2.3 构建pGEX-4T-1-p53S质粒 | 第35-38页 |
| 2.2.3.1 酶切 | 第35-36页 |
| 2.2.3.2 pGEX-4T-1载体去磷酸化 | 第36-37页 |
| 2.2.3.3 连接 | 第37页 |
| 2.2.3.4 转化大肠杆菌XL-10 | 第37页 |
| 2.2.3.5 小提pGEX-4T-1-p53S质粒 | 第37页 |
| 2.2.3.6 转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第37-38页 |
| 2.2.4 GST-p53S融合蛋白的诱导表达及其检测 | 第38-42页 |
| 2.2.4.1 GST-p53S融合蛋白的诱导表达 | 第38页 |
| 2.2.4.2 GST-p53S融合蛋白的检测 | 第38-42页 |
| 2.2.5 p53S蛋白的纯化 | 第42-45页 |
| 2.2.5.1 GST-p53S融合蛋白的纯化 | 第42页 |
| 2.2.5.2 p53S蛋白的释放 | 第42-43页 |
| 2.2.5.3 p53S蛋白的纯化 | 第43-45页 |
| 第三章 结果与分析 | 第45-55页 |
| 3.1 成功构建pEASY-T1-p53载体 | 第45-46页 |
| 3.2 成功构建pEASY-T1-p53S载体 | 第46-47页 |
| 3.3 成功构建pGEX-4T-1-p53S表达载体 | 第47-48页 |
| 3.4 成功诱导表达产生GST-p53S融合蛋白 | 第48-49页 |
| 3.5 利用GST标签对GST-p53S融合蛋白纯化 | 第49-51页 |
| 3.6 切除GST标签,释放p53S蛋白 | 第51页 |
| 3.7 通过疏水作用层析,纯化p53S蛋白 | 第51-52页 |
| 3.8 分析与讨论 | 第52-55页 |
| 第四章 总结与展望 | 第55-57页 |
| 第二部分 癌基因Kras~(G12D)与p53S促进小鼠罹患肺癌 | 第57-87页 |
| 第一章 绪论 | 第57-61页 |
| 1.1 原癌基因Ras与肿瘤发生 | 第57-58页 |
| 1.2 肿瘤发生中p53与Ras的协同作用 | 第58页 |
| 1.3 Kras~(G12D/+)小鼠模型 | 第58-59页 |
| 1.4 Cre小鼠模型 | 第59-60页 |
| 1.5 本研究的主要内容及意义 | 第60-61页 |
| 第二章 材料与方法 | 第61-75页 |
| 2.1 实验材料 | 第61-64页 |
| 2.1.1 试剂配制 | 第61-62页 |
| 2.1.2 试剂信息 | 第62-63页 |
| 2.1.3 实验器材及仪器 | 第63-64页 |
| 2.2 实验方法 | 第64-75页 |
| 2.2.1 获得Cre Kras~(G12D/+)p53S的小鼠 | 第64-68页 |
| 2.2.1.1 设置mating cage | 第64页 |
| 2.2.1.2 观察plug | 第64-65页 |
| 2.2.1.3 基因型鉴定 | 第65-68页 |
| 2.2.2 DNA水平检测Kras~(G12D)表达 | 第68-70页 |
| 2.2.3 HE染色和IHC | 第70-73页 |
| 2.2.3.1 石蜡包埋 | 第70页 |
| 2.2.3.2 石蜡切片制作 | 第70-71页 |
| 2.2.3.3 HE染色 | 第71-72页 |
| 2.2.3.4 IHC | 第72-73页 |
| 2.2.4 WB检测Cre、Kras、p53S的表达 | 第73-75页 |
| 2.2.4.1 样品处理 | 第73-74页 |
| 2.2.4.2 蛋白定量 | 第74页 |
| 2.2.4.3 WB | 第74-75页 |
| 第三章 结果与分析 | 第75-85页 |
| 3.1 成功获得Cre Kras~(G12D/+)p53S的小鼠 | 第75-76页 |
| 3.2 使用LSL检测引物检测Kras~(G12D)基因表达 | 第76-77页 |
| 3.3 Cre Kras~(G12D/+)p53S小鼠肺组织病理分析 | 第77-80页 |
| 3.4 Cre Kras~(G12D/+)p53S小鼠组织WB | 第80-81页 |
| 3.5 分析与讨论 | 第81-85页 |
| 第四章 总结与展望 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-95页 |
| 附录 攻读硕士期间发表论文目录 | 第95页 |
