| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1类胡萝卜素裂解途径 | 第13-15页 |
| 1.1.1 类胡萝卜素羟化酶裂解的途径 | 第13-14页 |
| 1.1.2 类胡萝卜素双加氧酶裂解途径 | 第14-15页 |
| 1.2 类胡萝卜素裂解与植物抗性 | 第15-25页 |
| 1.2.1 裂解转化产物脱落酸(ABA)提高植物抗性 | 第16-22页 |
| 1.2.2 9-顺式-环氧类胡萝卜素裂解双氧合酶(NCEDs)在植物抗逆中的作用 | 第22-23页 |
| 1.2.3 类胡萝卜素裂解双加氧酶(CCDs)在植物抗逆中的作用 | 第23-25页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-54页 |
| 2.1 试验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 植物材料的培养 | 第26页 |
| 2.1.3 菌株和质粒载体 | 第26页 |
| 2.1.4 酶、抗生素、试剂盒、各种化学药品及生化试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第27-28页 |
| 2.2 试验处理 | 第28-31页 |
| 2.2.1 对平邑甜茶的处理 | 第28-30页 |
| 2.2.2 对拟南芥的处理 | 第30-31页 |
| 2.3 指标测定与分析方法 | 第31-54页 |
| 2.3.1 植物组织总RNA提取 | 第31-32页 |
| 2.3.2 反转录cDNA第一链的合成 | 第32-33页 |
| 2.3.3 PCR扩增 | 第33页 |
| 2.3.4 连接反应 | 第33-34页 |
| 2.3.5 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第34-35页 |
| 2.3.6 碱法小量质粒DNA的提取 | 第35页 |
| 2.3.7 质粒DNA的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.8 DNA片段的回收 | 第36页 |
| 2.3.9 DNA序列的测定 | 第36页 |
| 2.3.10 植物基因组DNA的提取及纯化 | 第36-38页 |
| 2.3.11 目的基因启动子的克隆 | 第38-40页 |
| 2.3.12 半定量RT-PCR(semi quantitative RT-PCR) | 第40-41页 |
| 2.3.13 实时荧光定量PCR | 第41-42页 |
| 2.3.14 原核表达 | 第42-44页 |
| 2.3.15 共表达 | 第44-45页 |
| 2.3.16 表达载体的构建 | 第45-48页 |
| 2.3.17 根癌农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第48页 |
| 2.3.18 拟南芥的培养、遗传转化及检测 | 第48-50页 |
| 2.3.19 生理生化指标的测定 | 第50-52页 |
| 2.3.20 数据分析 | 第52-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-103页 |
| 3.1 平邑甜茶根系MhNCED3和MhCCD1及其启动子的克隆与分析 | 第54-59页 |
| 3.1.1 MhNCED3及其启动子的分离与分析 | 第54-56页 |
| 3.1.2 MhCCD1及其启动子的分离与分析 | 第56-59页 |
| 3.2 MhNCED3和MhCCD1表达载体的构建及对拟南芥的遗传转化 | 第59-65页 |
| 3.2.1 MhNCED3表达载体的构建及对拟南芥的遗传转化 | 第59-62页 |
| 3.2.2 MhCCD1表达载体的构建及对拟南芥的遗传转化 | 第62-65页 |
| 3.3 MhNCED3基因对渗透、硫酸镉和氯化钠胁迫的响应 | 第65-90页 |
| 3.3.1 MhNCED3基因的区位表达 | 第65页 |
| 3.3.2 渗透和镉胁迫对平邑甜茶根系MhNCED3表达和ABA积累的影响 | 第65-68页 |
| 3.3.3 过表达MhNCED3拟南芥ABA积累和种子萌发 | 第68-70页 |
| 3.3.4 过表达MhNCED3拟南芥对渗透胁迫的响应 | 第70-73页 |
| 3.3.5 过表达MhNCED3拟南芥对硫酸镉胁迫的响应 | 第73-78页 |
| 3.3.6 平邑甜茶MhNCED3对氯化钠胁迫的响应 | 第78-90页 |
| 3.4 MhNCED3对NO及其抑制剂的响应 | 第90-94页 |
| 3.4.1 NO及其抑制剂对平邑甜茶根系MhNCED3表达和ABA积累的影响 | 第90-92页 |
| 3.4.2 过表达MhNCED3拟南芥内NO合成酶基因的表达 | 第92页 |
| 3.4.3 NO及其抑制剂处理下过表达MhNCED3拟南芥NO生成速率 | 第92-94页 |
| 3.5 平邑甜茶MhCCD1对渗透、硫酸镉及AM真菌处理的响应 | 第94-101页 |
| 3.5.1 渗透、硫酸镉及AM真菌处理对平邑甜茶根系MhCCD1表达的影响 | 第94-97页 |
| 3.5.2 MhCCD1蛋白的体外裂解 | 第97-99页 |
| 3.5.3 过表达MhCCD1对拟南芥类胡萝卜素含量的影响 | 第99-101页 |
| 3.6 MhNCED3与MHCCD1过表达对拟南芥CCD和NCED基因转录的影响 | 第101-103页 |
| 3.6.1 MhNCED3过表达对拟南芥AtCCD1,AtCCD7和AtCCD8转录的影响 | 第101页 |
| 3.6.2 MhCCD1过表达对拟南芥AtNCED3、AtCCD7和AtCCD8转录的影响 | 第101-103页 |
| 4 讨论 | 第103-110页 |
| 4.1 MhNCED3调节非生物胁迫下根系ABA的合成 | 第103-104页 |
| 4.2 过表达MhNCED3提高拟南芥在渗透胁迫和Cd~(2+)肋迫下抗性 | 第104-106页 |
| 4.2.1 过表达MhNCED3提高渗透胁迫和Cd~(2+)胁迫下拟南芥种子萌发率 | 第104页 |
| 4.2.2 过表达MhNCED3提高拟南芥在渗透胁迫下抗性 | 第104-105页 |
| 4.2.3 过表达MhNCED3提高拟南芥在Cd~(2+)胁迫下抗性 | 第105-106页 |
| 4.3 MhNCED3在CI~-胁迫下的响应 | 第106-108页 |
| 4.3.1 平邑甜茶根系对CI~-胁迫的反应 | 第106-107页 |
| 4.3.2 过表达MhNCED3提高拟南芥在Cl~-胁迫下抗性 | 第107-108页 |
| 4.4 MhCCD1在AM真菌处理下类胡萝卜素裂解中的作用 | 第108-109页 |
| 4.5 MhNCED3与MhCCD1的关系 | 第109-110页 |
| 5 结论 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-125页 |
| 附录 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第128页 |
