| 中文摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 木质纤维素的降解 | 第9-12页 |
| 1.2.1 木质纤维素 | 第9-10页 |
| 1.2.2 纤维素的预处理 | 第10-11页 |
| 1.2.3 纤维素的酶解机制 | 第11页 |
| 1.2.4 纤维素酶的协同作用及酶解过程中的辅助蛋白 | 第11-12页 |
| 1.3 膨胀素和类膨胀素蛋白在纤维素降解方面的研究 | 第12-18页 |
| 1.3.1 膨胀素和类膨胀素的定义 | 第12-13页 |
| 1.3.2 膨胀素和类膨胀素蛋白的表达及纯化 | 第13-14页 |
| 1.3.3 膨胀素和类膨胀素的结构 | 第14-15页 |
| 1.3.4 膨胀素和类膨胀素的对纤维素的松驰作用 | 第15页 |
| 1.3.5 膨胀素类膨胀素在纤维素水解方面的协同作用 | 第15-17页 |
| 1.3.6 温度和pH对协同水解作用的影响 | 第17页 |
| 1.3.7 膨胀素类膨胀素蛋白的结合特性 | 第17-18页 |
| 1.4 毕氏酵母表达系统 | 第18-19页 |
| 1.5 课题的提出及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-36页 |
| 2.1 材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第21-23页 |
| 2.1.2 菌株、载体及引物 | 第23页 |
| 2.1.3 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.4 基因组提取及电转化试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.5 蛋白电泳试剂 | 第25页 |
| 2.1.6 Western blot试剂配制 | 第25页 |
| 2.1.7 蛋白纯化试剂 | 第25页 |
| 2.1.8 LeEXP2协同水解实验材料及试剂 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.2.2 表达载体pPICZαA-LeEXP2的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.3 毕氏酵母感受态细胞的制备与电转化 | 第28-29页 |
| 2.2.4 高表达重组菌株的筛选 | 第29页 |
| 2.2.5 LeEXP2的优化表达 | 第29页 |
| 2.2.6 蛋白浓度的测定 | 第29-30页 |
| 2.2.7 重组蛋白LeEXP2电泳分析 | 第30-31页 |
| 2.2.8 重组蛋白LeEXP2 Western blotting分析 | 第31-32页 |
| 2.2.9 重组LeEXP2的纯化与去糖基化反应 | 第32-33页 |
| 2.2.10 LeEXP2对滤纸的膨胀实验 | 第33页 |
| 2.2.11 LeEXP2协同酶解实验 | 第33-34页 |
| 2.2.12 检测温度、pH、金属离子及变性剂对LeEXP2协同活性的影响 | 第34页 |
| 2.2.13 LeEXP2热稳定性的测定 | 第34页 |
| 2.2.14 LeEXP2与不同底物结合实验 | 第34-36页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第36-54页 |
| 3.1 生物信息学分析 | 第36-38页 |
| 3.2 重组毕氏酵母表达载体的构建及表达LeEXP2基因重组菌 | 第38-40页 |
| 3.3 筛选高效表达LeEXP2基因的重组菌株 | 第40-41页 |
| 3.4 LeEXP2的表达优化 | 第41-42页 |
| 3.5 重组LeEXP2的纯化和去糖基化 | 第42-43页 |
| 3.6 重组LeEXP2的膨胀活性 | 第43-44页 |
| 3.7 重组LeEXP2和内切酶在纤维素酶解时的协同作用 | 第44-47页 |
| 3.8 pH和温度对重组LeEXP2和内切纤维素酶协同活性的影响 | 第47-49页 |
| 3.9 金属离子对LeEXP2和内切纤维素酶协同活性的影响 | 第49-50页 |
| 3.10 变性试剂对重组LeEXP2和内切纤维素酶协同活性的影响 | 第50页 |
| 3.11 LeEXP2的热稳定性分析 | 第50-52页 |
| 3.12 LeEXP2的结合活性 | 第52-54页 |
| 第四章 结论与展望 | 第54-56页 |
| 4.1 结论 | 第54页 |
| 4.2 创新点 | 第54页 |
| 4.3 展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
