| 摘要 | 第2-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 植物花药的发育 | 第10-12页 |
| 1.1.1 植物花药发育的过程 | 第10-11页 |
| 1.1.2 花药不同发育阶段的结构特征 | 第11-12页 |
| 1.2 花粉壁的发育 | 第12-14页 |
| 1.2.1 花粉壁的结构 | 第13页 |
| 1.2.2 绒毡层在花粉壁发育中的作用 | 第13-14页 |
| 1.3 植物雄性不育 | 第14-17页 |
| 1.3.1 与植物雄性不育的相关基因 | 第14-17页 |
| 1.3.2 雄性不育基因MS2 | 第17页 |
| 1.4 本研究的背景、内容、目的及意义 | 第17-19页 |
| 1.4.1 本研究的背景 | 第17-18页 |
| 1.4.2 本研究的内容 | 第18页 |
| 1.4.3 本研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.2 菌株与质粒 | 第19页 |
| 2.3 试剂与仪器 | 第19-20页 |
| 2.4 实验方法 | 第20-33页 |
| 2.4.1 生物信息学分析 | 第20页 |
| 2.4.2 BnMS2和AtMS2序列的获得 | 第20页 |
| 2.4.3 BnMS2在甘蓝型油菜不同组织中的表达量分析 | 第20-23页 |
| 2.4.4 RNAi干扰载体的构建 | 第23-27页 |
| 2.4.4.1 目的片段克隆 | 第23页 |
| 2.4.4.2 RNAi-BnMS2干扰载体的构建 | 第23-27页 |
| 2.4.5 甘蓝型油菜及拟南芥的遗传转化 | 第27-29页 |
| 2.4.5.1 RNAi-BnMS2甘蓝型油菜遗传转化 | 第27-28页 |
| 2.4.5.2 RNAi-AtMS2拟南芥遗传转化 | 第28-29页 |
| 2.4.6 转基因植株的分子鉴定 | 第29-30页 |
| 2.4.6.1 甘蓝型油菜T_0代RNAi-BnMS2植株PCR阳性鉴定及qPCR检测 | 第29页 |
| 2.4.6.2 拟南芥RNAi-AtMS2植株PCR阳性鉴定以及qPCR检测 | 第29-30页 |
| 2.4.7 转基因植株形态学分析 | 第30页 |
| 2.4.7.1 拟南芥T_2代RNAi-AtMS2植株表型观察 | 第30页 |
| 2.4.7.2 甘蓝型油菜和拟南芥转基因植株花器官形态观察 | 第30页 |
| 2.4.7.3 拟南芥T_2代RNAi-AtMS2植株角果及种子形态观察 | 第30页 |
| 2.4.7.4 甘蓝型油菜和拟南芥转基因植株花粉形态观察 | 第30页 |
| 2.4.8 转基因植株的细胞学分析 | 第30-31页 |
| 2.4.9 候选基因编码蛋白的亚细胞定位分析 | 第31-33页 |
| 2.4.9.1 烟草瞬时表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.4.9.2 烟草表皮细胞的转化和荧光显微镜观察 | 第32-33页 |
| 3 结果分析 | 第33-55页 |
| 3.1 不同物种中MS2系统发生关系 | 第33页 |
| 3.2 MS2在甘蓝型油菜和拟南芥中的同源性比较分析 | 第33-35页 |
| 3.3 干扰载体pFGC5941M-AtMS2转基因拟南芥的获得 | 第35-40页 |
| 3.3.1 干扰载体pFGC5941M-AtMS2的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.2 转基因拟南芥的获得 | 第36-37页 |
| 3.3.3 拟南芥T_1代转基因植株的分子鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.4 拟南芥T_2代转基因植株的分子鉴定 | 第38-40页 |
| 3.4 干扰载体pFGC5941M-AtMS2转基因拟南芥T_2代的形态学分析 | 第40-42页 |
| 3.4.1 T_2代转基因拟南芥的表型分析 | 第40-41页 |
| 3.4.2 T_2代转基因拟南芥的花器官形态分析 | 第41-42页 |
| 3.4.3 T_2代转基因拟南芥的花粉染色观察 | 第42页 |
| 3.5 干扰载体pFGC5941M-AtMS2 T_2代转基因拟南芥的细胞学分析 | 第42-45页 |
| 3.6 甘蓝型油菜各组织发育BnMS2的表达量分析 | 第45页 |
| 3.7 BnMS2蛋白体外表达 | 第45-47页 |
| 3.7.1 构建pGEX-6p-1-BnMS2原核表达载体 | 第45-46页 |
| 3.7.2 Western Blot | 第46-47页 |
| 3.8 BnMS2蛋白的亚细胞定位 | 第47-48页 |
| 3.8.1 烟草瞬时表达载体的构建 | 第47页 |
| 3.8.2 BnMS2蛋白亚细胞定位 | 第47-48页 |
| 3.9 干扰载体pFGC5941M-BnMS2转基因甘蓝型油菜的获得 | 第48-50页 |
| 3.9.1 转基因甘蓝型油菜的获得 | 第48-49页 |
| 3.9.2 甘蓝型油菜转基因植株的分子鉴定 | 第49-50页 |
| 3.10 干扰载体pFGC5941M-BnMS2转基因甘蓝型油菜的形态学分析 | 第50-52页 |
| 3.10.1 RNAi-BnMS2甘蓝型油菜的花器官形态分析 | 第50-52页 |
| 3.10.2 RNAi-BnMS2甘蓝型油菜花粉染色分析 | 第52页 |
| 3.11 干扰载体pFGC5941M-BnMS2转基因甘蓝型油菜的细胞学分析 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 4.1 RNAi技术获得转基因油菜和拟南芥 | 第55-56页 |
| 4.2 BnMS2可能在小孢子发生过程中表达 | 第56页 |
| 4.3 BnMS2是影响花药发育关键的基因 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 硕士期间参与发表论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
