| 中文摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-28页 |
| ·肽链释放因子的发现 | 第17页 |
| ·第一类肽链释放因子的结构和功能 | 第17-26页 |
| ·第一类肽链释放因子的结构 | 第17-18页 |
| ·第一类肽链释放因子的功能 | 第18-26页 |
| ·游仆虫的特点及本课题的意义 | 第26-28页 |
| ·游仆虫的生物学特征及其研究优势 | 第26页 |
| ·本课题的研究意义 | 第26-28页 |
| 第二章 八肋游仆虫中两个第一类肽链释放因子的表达量比较 | 第28-36页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·主要的酶及生化试剂 | 第28页 |
| ·主要试剂的配制 | 第28-29页 |
| ·主要实验仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-33页 |
| ·八肋游仆虫细胞的培养 | 第29页 |
| ·寡聚核苷酸引物的设计 | 第29-30页 |
| ·八肋游仆虫总RNA的提取及cDNA的合成 | 第30-32页 |
| ·标准曲线的建立 | 第32页 |
| ·实时定量PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·结果 | 第33-35页 |
| ·八肋游仆虫总RNA的提取 | 第33页 |
| ·标准曲线的建立 | 第33页 |
| ·相对表达量的比较 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 参与蛋白质合成终止的两类肽链释放因子的相互作用 | 第36-50页 |
| ·材料 | 第36-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第36-37页 |
| ·主要的酶和生化试剂 | 第37页 |
| ·主要试剂的配制 | 第37-38页 |
| ·主要实验仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-44页 |
| ·寡聚核苷酸引物的设计 | 第38页 |
| ·eRF1b阅读框内无义密码子的定点突变 | 第38-41页 |
| ·pGBKT7-eRFlb重组质粒的构建 | 第41-43页 |
| ·检测蛋白质相互作用的方法--酵母双杂交 | 第43-44页 |
| ·结果 | 第44-47页 |
| ·利用PCR进行定点突变 | 第44-45页 |
| ·pGBKT7-eRF1b重组质粒的构建 | 第45页 |
| ·采用酵母双杂交的方法鉴定八肋游仆虫第一类肽链释放因子eRF1b与第二类肽链释放因子eRF3的相互作用 | 第45页 |
| ·采用酵母双杂交的方法鉴定甲第虫两类肽链释放因子的相互作用 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| 第四章 八肋游仆虫两个第一类肽链释放因子eRF1a和eRF1b在细胞中的共定位 | 第50-56页 |
| ·材料 | 第50-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第50页 |
| ·主要的酶和生化试剂 | 第50-51页 |
| ·主要试剂的配制 | 第51页 |
| ·主要实验仪器 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·寡聚核苷酸引物的设计 | 第51页 |
| ·pDsRed1-N1-Tel-eRF1b重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| ·pDsRed1-N1-Tel-eRF1b和pBTub-Tel-eRF1a的共定位 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-54页 |
| ·pDsRedl-N1-Tel-eRF1b重组质粒的构建 | 第53-54页 |
| ·pDsRedl-N1-Tel-eRF1b和pBTub-Tel-eRF1a的共定位 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 八肋游仆虫第一类肽链释放因子eRF1b及其突变体识别终止密码子的活性 | 第56-77页 |
| ·材料 | 第56-58页 |
| ·菌株和质粒 | 第56-57页 |
| ·主要的酶和生化试剂 | 第57-58页 |
| ·主要试剂的配制 | 第58页 |
| ·主要实验仪器 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-66页 |
| ·寡聚核苷酸引物的设计 | 第58-60页 |
| ·重组质粒的构建 | 第60-62页 |
| ·鉴定八肋游仆虫第一类肽链释放因子eRF1b识别终止密码子的性质 | 第62页 |
| ·通过双荧光素酶活鉴定八肋游仆虫第一类肽链释放因子eRF1b分别对三个终止密码子的识别活性 | 第62-64页 |
| ·实时定量PCR(Real-time PCR)测定糖原转化效率 | 第64-66页 |
| ·结果 | 第66-73页 |
| ·pDBF001重组质粒的构建 | 第66页 |
| ·突变获得的质粒 | 第66-68页 |
| ·通过5-FOA板鉴定八肋游仆虫第一类肽链释放因子eRF1b识别终止密码子的性质 | 第68页 |
| ·通过双荧光素酶报告系统鉴定八肋游仆虫第一类肽链释放因子eRF1b对三个终止密码子的识别活性 | 第68-70页 |
| ·实时定量Real-time PCR鉴定糖原转化 | 第70-73页 |
| ·讨论 | 第73-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 总结与展望 | 第83-86页 |
| 总结 | 第83-84页 |
| 展望 | 第84-86页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 个人简况及联系方式 | 第89-91页 |
