| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 胚柄的形成及形态多样性 | 第12-14页 |
| 2 胚柄在胚胎发育中的功能分析 | 第14-15页 |
| ·胚柄是胚体发育所需营养和生长因子的运输通道 | 第14页 |
| ·胚柄中植物激素的合成 | 第14-15页 |
| 3 胚柄发育过程中的特异性基因 | 第15-17页 |
| 4 蛋白质—DNA 相互作用的研究方法 | 第17-20页 |
| ·电泳迁移率变动分析(electrophoresis mobihty shift assay，EMSA) | 第18页 |
| ·依赖于 LM-PCR 的基因组足迹法 | 第18页 |
| ·免疫沉淀法(chromatin immunoprecipitation analysis，ChIP) | 第18-19页 |
| ·酵母单杂交技术(yeast one-hybrid system) | 第19-20页 |
| 5 本研究的目的和实施方案 | 第20-22页 |
| 第二部分 实验论文 | 第22-58页 |
| 一、材料和方法 | 第22-45页 |
| 1 实验材料 | 第22-30页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·酶及化学试剂 | 第22页 |
| ·培养基及溶液 | 第22-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·引物序列 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-45页 |
| ·对照实验 | 第30-31页 |
| ·构建和验证载体 | 第31-34页 |
| ·常规实验准备 | 第31-34页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态的制备及转化 | 第31页 |
| ·转化步骤 | 第31页 |
| ·从胶中回收目的片段 | 第31-32页 |
| ·质粒的提取 | 第32-33页 |
| ·酵母感受态细胞的准备 | 第33页 |
| ·酵母感受态细胞的转化过程 | 第33-34页 |
| ·合成并克隆靶序列 | 第34页 |
| ·验证靶基因（诱饵） | 第34页 |
| ·拟南芥幼嫩种子cDNA 文库的构建 | 第34-41页 |
| ·拟南芥幼嫩种子总 RNA 的提取 | 第35-37页 |
| ·CTAB-LiCl 法 | 第35页 |
| ·CTAB-异丙醇法 | 第35-36页 |
| ·百泰克试剂盒法 | 第36-37页 |
| ·Trizol 法 | 第37页 |
| ·总 RNA 浓度及其完整性检测 | 第37页 |
| ·m RNA 的纯化 | 第37-39页 |
| ·第一链cDNA 的合成 | 第39-40页 |
| ·LD-PCR 法进行第一链cDNA 的扩增 | 第40页 |
| ·cDNA 的纯化 | 第40-41页 |
| ·单杂交文库的筛选 | 第41-43页 |
| ·确认阳性克隆并提取酵母质粒 | 第43-45页 |
| ·重新划线来确定阳性克隆表型 | 第43页 |
| ·通过酵母菌落 PCR 消除重复克隆 | 第43-45页 |
| 二、结果与分析 | 第45-54页 |
| 1 空白对照实验 | 第45-46页 |
| 2 P5A 载体的构建及验证 | 第46-48页 |
| ·P5A 诱饵载体的构建及测序验证 | 第46-47页 |
| ·P5A 诱饵载体的不同缺陷培养基验证 | 第47-48页 |
| 3 拟南芥幼嫩种子总 RNA 的提取 | 第48-54页 |
| ·拟南芥幼嫩种子的获得 | 第48页 |
| ·筛选及优化拟南芥幼嫩种子 RNA 的提取方法 | 第48-52页 |
| ·多种方法提取的拟南芥及烟草幼嫩种子总 RNA 完整性检测 | 第48-50页 |
| ·多种方法提取的拟南芥及烟草幼嫩种子总 RNA 浓度及纯度检测 | 第50页 |
| ·cDNA 的合成及琼脂糖凝胶电泳检测 | 第50-52页 |
| 4 拟南芥幼嫩种子cDNA 文库的构建 | 第52页 |
| 5 阳性克隆的筛选 | 第52页 |
| ·三次划线去掉重复阳性克隆 | 第52-53页 |
| ·阳性克隆的检测 | 第53-54页 |
| 三、讨论 | 第54-58页 |
| 1 拟南芥及烟草幼嫩种子总 RNA 的提取 | 第55-56页 |
| 2 报告子3-AT 的作用鉴定及适合浓度的测定 | 第56页 |
| 3 酵母感受态的制备 | 第56-57页 |
| 4 阳性克隆的筛选 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第62页 |
