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DHV-Ⅰ单克隆抗体的制备与胶体金试纸条的研制

中文摘要第1-11页
Abstract第11-13页
1 引言第13-29页
   ·鸭Ⅰ型病毒性肝炎病毒(DHV-I)概述第13-15页
     ·DHV-Ⅰ的病毒学分类与理化特性第13-14页
     ·DHV-Ⅰ病原性第14页
     ·DHV-Ⅰ流行病学第14-15页
   ·DHV-Ⅰ分子生物学研究第15-18页
     ·病毒基因组及主要结构和功能蛋白的特性第15-17页
     ·DHV-Ⅰ感染和致病的分子机制第17-18页
   ·鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的诊断方法第18-21页
     ·根据临床症状初步诊断第18-19页
     ·根据病理剖检变化诊断第19页
     ·病原学诊断第19-20页
     ·血清学诊断第20页
     ·分子生物学诊断第20-21页
   ·DHV-Ⅰ的预防与治疗第21-22页
     ·预防第21-22页
     ·治疗第22页
   ·单克隆抗体研究进展第22-23页
   ·免疫胶体金概述第23-27页
     ·胶体金技术的基本原理第24-25页
     ·免疫层析的概念第25页
     ·免疫胶体金技术的特点第25-26页
     ·试纸条的检测原理第26-27页
   ·本研究的目的及意义第27-29页
2 材料与方法第29-54页
   ·材料第29-32页
     ·菌(毒)株第29页
     ·实验动物及细胞株第29页
     ·酶和相关试剂第29页
     ·主要仪器第29-30页
     ·引物设计与合成第30页
     ·溶液系统第30-32页
   ·方法第32-54页
     ·病毒的增殖与纯化第32-33页
     ·病毒总RNA 提取第33页
     ·DHV-Ⅰ VP1 目的片段的扩增第33-35页
     ·电泳检测第35页
     ·目的核苷酸克隆测序第35-38页
     ·重组表达质粒的构建第38-40页
     ·重组质粒在大肠杆菌中的表达与检测第40-41页
     ·Balb/c 小鼠的免疫第41页
     ·间接 ELISA 检测方法的建立第41-45页
     ·SP2/0 骨髓瘤细胞的培养第45页
     ·饲养细胞的制备第45页
     ·细胞融合及培养第45-46页
     ·筛选第46页
     ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆第46-47页
     ·杂交瘤细胞的冻存与复苏第47页
     ·腹水的制备第47页
     ·单克隆抗体的鉴定第47-48页
     ·单克隆抗体的纯化第48-49页
     ·金标单克隆抗体的制备与纯化第49-51页
     ·金标抗体吸附于玻璃纤维第51页
     ·NC 膜包被单抗和二抗第51-52页
     ·样品垫的选择第52页
     ·最适标记金颗粒大小的选择第52页
     ·免疫层析试纸条的组装第52-53页
     ·免疫层析试纸条的性能测试第53-54页
3 结果与分析第54-66页
   ·鸡胚增殖结果第54页
   ·病毒纯化结果第54页
   ·目的片段的测序结果第54-55页
   ·重组表达质粒的构建和SDS-PAGE 结果第55-56页
   ·Western blot 分析结果第56-58页
   ·间接 ELISA 检测方法的建立第58页
   ·Balb/c 小鼠的免疫及 SP2/0 骨髓瘤细胞的培养结果第58页
   ·融合筛选结果第58-59页
   ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆结果第59页
   ·单克隆抗体鉴定结果第59-61页
   ·单抗的纯化与鉴定第61页
   ·胶体金标记抗体最低稳定量的测定第61-62页
   ·金标抗体吸附于玻璃纤维第62页
   ·NC 膜包被单抗和二抗第62-63页
   ·样品垫的选择第63页
   ·最适标记金颗粒大小的选择第63-65页
   ·免疫层析试纸条性能的测试第65-66页
4 讨论第66-73页
   ·DHV-Ⅰ VP1 的表达第66页
   ·小鼠的免疫第66-67页
   ·建立筛选方法第67页
   ·细胞融合第67-69页
   ·阳性克隆的筛选第69页
   ·腹水的制备第69-70页
   ·单克隆抗体的纯化第70页
   ·蛋白与胶体金结合最佳pH第70页
   ·NC 膜的选择第70页
   ·胶体金颗粒大小的选择第70-71页
   ·试纸条的假阳性问题第71-73页
5 结论第73-74页
6 参考文献第74-82页
7 致谢第82页

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