| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 脱氧核糖醛缩酶的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 醛缩酶简介 | 第12页 |
| 1.1.2 脱氧核糖醛缩酶的性质 | 第12页 |
| 1.1.3 脱氧核糖醛缩酶的来源 | 第12-13页 |
| 1.1.4 脱氧核糖醛缩酶的催化机理 | 第13页 |
| 1.1.5 脱氧核糖醛缩酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.6 脱氧核糖醛缩酶应用的缺陷性 | 第14页 |
| 1.1.7 脱氧核糖醛缩酶的制备 | 第14-15页 |
| 1.2 巴斯德毕赤酵母表达系统简介 | 第15-22页 |
| 1.2.1 毕赤酵母生物学性质 | 第15页 |
| 1.2.2 毕赤酵母中外源基因表达调控机理 | 第15-16页 |
| 1.2.3 外源蛋白在毕赤酵母中的表达策略 | 第16-18页 |
| 1.2.4 表达载体插宿主菌的方式 | 第18-19页 |
| 1.2.5 影响外源蛋白表达的关键因素 | 第19-21页 |
| 1.2.6 外源蛋白的分离与纯化 | 第21-22页 |
| 1.2.7 毕赤酵母表达系统尚存在的问题 | 第22页 |
| 1.3 本文研究意义与内容 | 第22-25页 |
| 1.3.1 研究背景意义 | 第22-24页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 第2章 脱氧核糖醛缩酶真核重组菌构建与表达 | 第25-41页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1 菌株及质粒 | 第26页 |
| 2.2.2 主要试剂与酶 | 第26页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2.4 实验溶液与培养基 | 第26-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.3.1 重组质粒 pPIC9K-DERA 的构建 | 第28-32页 |
| 2.3.2 重组毕赤酵母菌株 GS115-pPIC9K-DERA 的构建 | 第32-35页 |
| 2.3.3 GS115-pPIC9K-DERA 的诱导表达 | 第35页 |
| 2.3.4 SDS-PAGE 电泳检测诱导表达 | 第35-36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-40页 |
| 2.4.1 DERA 基因的扩增 | 第36页 |
| 2.4.2 pPIC9K 质粒的提取 | 第36-37页 |
| 2.4.3 PCR 验证重组载体 pPIC9K-DERA | 第37-38页 |
| 2.4.4 MD/MM 平板及多拷贝筛选的结果 | 第38页 |
| 2.4.5 重组 GS115-pPIC9K-DERA 菌株 PCR 验证结果 | 第38-39页 |
| 2.4.6 诱导 GS115-pPIC9K-DERA 表达 DERA | 第39-40页 |
| 2.5 本章小结 | 第40-41页 |
| 第3章 脱氧核糖醛缩酶原核工程菌的构建与表达 | 第41-51页 |
| 3.1 引言 | 第41-42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-44页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第42页 |
| 3.2.2 主要试剂与酶 | 第42页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.4 培养基及主要溶液配制 | 第43页 |
| 3.2.5 引物 | 第43-44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-47页 |
| 3.3.1 菌株活化 | 第44页 |
| 3.3.2 DERA 基因的扩增 | 第44-45页 |
| 3.3.3 pET-DsbA 质粒的提取 | 第45页 |
| 3.3.4 DH5α和 BL21 感受态细胞制备 | 第45页 |
| 3.3.5 DERA 片段与 pET-DsbA 质粒双酶切 | 第45页 |
| 3.3.6 双酶产物回收与连接 | 第45-46页 |
| 3.3.7 连接产物转化至 DH5α | 第46页 |
| 3.3.8 pET-DsbA-DERA 重组载体的鉴定 | 第46页 |
| 3.3.9 重组 BL21(pET- DsbA-DERA) 菌株的构建 | 第46页 |
| 3.3.10 BL21（pET- DsbA-DERA）重组菌株的诱导表达 | 第46-47页 |
| 3.3.11 SDS-PAGE 电泳检测诱导表达 | 第47页 |
| 3.4 结果与分析 | 第47-49页 |
| 3.4.1 目的 DNA 的扩增 | 第47页 |
| 3.4.2 pET-DsbA 质粒提取结果 | 第47-48页 |
| 3.4.3 重组载体 pET-DsbA-DERA 验证 | 第48页 |
| 3.4.4 重组菌株 BL21 诱导表达结果 | 第48-49页 |
| 3.5 本章小结 | 第49-51页 |
| 第4章 脱氧核糖醛缩酶的分离纯化及其性质研究 | 第51-60页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51-53页 |
| 4.2.1 菌株 | 第51-52页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第52页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第52页 |
| 4.2.4 主要培养基与溶液及配置 | 第52-53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-55页 |
| 4.3.1 GS-DERA 的分离与纯化 | 第53页 |
| 4.3.2 BL-DERA 的分离与纯化 | 第53页 |
| 4.3.3 DERA 活性测定 | 第53-54页 |
| 4.3.4 不同 pH 缓冲体系对 DERA 活性的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.5 DERA 温度稳定性探究 | 第55页 |
| 4.3.6 DERA 的 pH 稳定性探究 | 第55页 |
| 4.4 结果与分析 | 第55-59页 |
| 4.4.1 GS-DERA 纯化结果 | 第55页 |
| 4.4.2 BL-DERA 分离纯化结果 | 第55-56页 |
| 4.4.3 DERA 活性检测结果 | 第56-57页 |
| 4.4.4 DERA 最适 pH 的选择 | 第57-58页 |
| 4.4.5 DERA 热稳定性结果 | 第58页 |
| 4.4.6 DERA 的 pH 稳定性结果 | 第58-59页 |
| 4.5 本章小结 | 第59-60页 |
| 第5章 脱氧核糖醛缩酶的应用研究 | 第60-66页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 实验材料 | 第60-61页 |
| 5.2.1 酶与主要试剂 | 第60页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第60-61页 |
| 5.3 实验方法 | 第61-62页 |
| 5.3.1 DERA 对乙醛耐受力的研究 | 第61页 |
| 5.3.2 DERA 催化乙醛缩合反应的探究 | 第61页 |
| 5.3.3 DERA 催化合成 DRP 的探究 | 第61-62页 |
| 5.4 结果与分析 | 第62-64页 |
| 5.4.1 DERA 对乙醛耐受力结果 | 第62-63页 |
| 5.4.2 DERA 连续催化乙醛缩合反应 | 第63页 |
| 5.4.3 DERA 催化合成 DRP | 第63-64页 |
| 5.5 本章小结 | 第64-66页 |
| 第6章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 6.1 全文总结 | 第66-67页 |
| 6.2 创新点 | 第67页 |
| 6.3 展望 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第76页 |
