| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 前言 | 第12-17页 |
| 1.鼠疫耶尔森氏菌的生物学特性与毒力的调控机制 | 第12-13页 |
| 1.1 鼠疫菌的生物学特性 | 第12页 |
| 1.2 鼠疫菌的毒力因子与调控机制 | 第12-13页 |
| 2.小RNA的基本特征 | 第13-14页 |
| 3.小RNA调控鼠疫菌毒力的研究 | 第14-15页 |
| 4.本课题的研究内容、目的、意义及技术路线 | 第15-17页 |
| 第一章 小RNAHmsA的一般特性及对小鼠的感染作用 | 第17-21页 |
| 引言 | 第17页 |
| 材料和方法 | 第17-19页 |
| 1.材料 | 第17-18页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第17页 |
| 1.2 试剂和动物模型 | 第17页 |
| 1.3 主要使用仪器 | 第17-18页 |
| 2.方法 | 第18-19页 |
| 2.1 鼠疫菌甘油菌种的细菌培养 | 第18页 |
| 2.2 小RNAHmsA影响鼠疫耶尔森氏菌毒力的表型实验 | 第18-19页 |
| 2.2.1 鼠疫菌野生株(WT)与突变株(?hmsA)体内竞争指数的验证 | 第18-19页 |
| 结果与讨论 | 第19-21页 |
| 1.1 小RNAHmsA对鼠疫菌的毒力具有抑制作用 | 第19-20页 |
| 1.2 讨论 | 第20-21页 |
| 第二章 小RNAHmsA对鼠疫菌基因表达的调控 | 第21-36页 |
| 引言 | 第21页 |
| 材料和方法 | 第21-30页 |
| 1.材料 | 第21-23页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 1.3 主要使用仪器 | 第22-23页 |
| 1.4 本章所用到的引物序列 | 第23页 |
| 2.方法 | 第23-30页 |
| 2.1 鼠疫菌甘油菌种的细菌培养 | 第23-24页 |
| 2.2 提取鼠疫菌的总RNA | 第24-25页 |
| 2.3 Northern印迹实验 | 第25-28页 |
| 2.3.1 设计制备RNA探针 | 第25-26页 |
| 2.3.2 电泳、转膜、交联和杂交 | 第26-27页 |
| 2.3.3 洗膜和显影 | 第27-28页 |
| 2.4 RNA-seq高通量测序 | 第28页 |
| 2.5 实时定量PCR反应(RealtimeQuantitativePCR,qRT-PCR) | 第28-30页 |
| 2.5.1 Ambion’sDNA-freeTMkit去DNA污染 | 第29页 |
| 2.5.2 逆转录反应 | 第29-30页 |
| 2.5.3 实时定量PCR反应 | 第30页 |
| 结果与讨论 | 第30-36页 |
| 1.1 NorthernBlotting实验验证RNA-seq样品的准确性 | 第30-31页 |
| 1.2 鼠疫菌野生株(WT)和突变株(?hmsA)基因表达差异性结果 | 第31-33页 |
| 1.3 实时定量PCR对转录组实验数据的验证 | 第33-34页 |
| 1.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 鼠疫菌小RNAHmsA直接调控靶标基因的筛选 | 第36-43页 |
| 引言 | 第36页 |
| 材料和方法 | 第36-40页 |
| 1.材料 | 第36-39页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第36-37页 |
| 1.2 主要使用试剂 | 第37页 |
| 1.3 主要使用仪器 | 第37页 |
| 1.4 本课题所用引物 | 第37-39页 |
| 2.方法 | 第39-40页 |
| 2.1 鼠疫菌甘油菌种的细菌培养 | 第39页 |
| 2.2 提取鼠疫菌总RNA | 第39-40页 |
| 2.3 RNA-seq高通量测序 | 第40页 |
| 2.4 实时定量PCR反应(RealtimeQuantitativePCR,qRT-PCR) | 第40页 |
| 结果与讨论 | 第40-43页 |
| 1.1 小RNAHmsA全基因组靶标基因的筛选 | 第40-43页 |
| 1.2 讨论 | 第43页 |
| 第四章 鼠疫菌小RNAHmsA直接靶基因的验证 | 第43-48页 |
| 引言 | 第43-44页 |
| 材料和方法 | 第44-47页 |
| 1.材料 | 第44-45页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂及试剂盒 | 第44页 |
| 1.3 主要的仪器 | 第44-45页 |
| 1.4 鼠疫菌甘油菌种的细菌培养 | 第45页 |
| 2.方法 | 第45-47页 |
| 2.1 LacZ报告基因融合实验翻译融合载体的构建 | 第45页 |
| 2.2 LacZ报告基因融合实验菌株的构建 | 第45-46页 |
| 2.3 检测β-半乳糖苷酶的活性 | 第46-47页 |
| 结果与讨论 | 第47-48页 |
| 1.1 小RNAHmsA对候选靶标基因的筛选 | 第47-48页 |
| 1.2 讨论 | 第48页 |
| 小结 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-52页 |
| 综述 | 第52-60页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 附录 | 第60-85页 |
| 附录1 试剂、溶液的配置方法 | 第60-62页 |
| 附录2 鼠疫菌野生株(WT)同突变株(?hmsA)的RNA-seq差异性表达基因列表 | 第62-81页 |
| 附录3 鼠疫菌小RNAHmsA过表达菌株阿拉伯糖诱导前后的RNA-seq差异性表达基因列表 | 第81-85页 |
| 本人简历 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
