| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 猪脑心肌炎病毒 | 第11-14页 |
| 1.1.1 EMCV基因结构及编码蛋白 | 第11页 |
| 1.1.2 EMCV流行病学和宿主范围 | 第11-12页 |
| 1.1.3 人畜共患病原 | 第12-13页 |
| 1.1.4 EMCV的发病机理 | 第13-14页 |
| 1.2 Annexin A2蛋白生物学特性及其功能 | 第14-15页 |
| 1.2.1 Annexin A2蛋白结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Annexin A2蛋白的功能 | 第15页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 毒株、细胞、质粒、引物和实验动物 | 第17-18页 |
| 2.1.2 试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第18页 |
| 2.1.4 培养基、抗生素和缓冲液的配制 | 第18-19页 |
| 2.2 试验方法 | 第19-31页 |
| 2.2.1 目的基因片段的扩增 | 第19-21页 |
| 2.2.2 EMCV各编码蛋白基因PCR产物和载体的酶切回收 | 第21页 |
| 2.2.3 EMCV各编码蛋白基因的目的片段与载体连接 | 第21-22页 |
| 2.2.4 转化BL21感受态细胞 | 第22页 |
| 2.2.5 阳性重组质粒的鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.6 EMCV重组2A蛋白的表达、鉴定、纯化及免疫BALB/c小鼠 | 第23-24页 |
| 2.2.7 EMCV 2A单克隆抗体的制备 | 第24-26页 |
| 2.2.8 EMCV 2A单克隆抗体腹水的制备 | 第26页 |
| 2.2.9 EMCV 2A单克隆抗体特异性分析 | 第26-27页 |
| 2.2.10 酵母双杂交筛选EMCV编码蛋白与ANXA2相互作用的蛋白 | 第27页 |
| 2.2.11 EMCV 2A蛋白与ANXA2相互作用的验证 | 第27-29页 |
| 2.2.12 ANXA2与EMCV 2A蛋白相互作用的功能研究 | 第29-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-43页 |
| 3.1 EMCV 2A单克隆抗体的制备 | 第31-34页 |
| 3.1.1 重组质粒pET-28a-2A和pCAGGS-Flag-C1-2A的构建 | 第31-32页 |
| 3.1.2 EMCV 2A蛋白的诱导表达与纯化结果 | 第32-33页 |
| 3.1.3 EMCV 2A单克隆抗体腹水效价测定结果 | 第33页 |
| 3.1.4 EMCV 2A单克隆抗体特异性分析结果 | 第33-34页 |
| 3.2 EMCV 2A蛋白与宿主蛋白ANXA2相互作用 | 第34-43页 |
| 3.2.1 EMCV编码蛋白基因的克隆及表达检测 | 第34-36页 |
| 3.2.2 筛选与ANXA2相互作用的EMCV编码蛋白 | 第36-37页 |
| 3.2.3 ANXA2与EMCV 2A蛋白相互作用 | 第37-39页 |
| 3.2.4 EMCV 2A蛋白和ANXA2相互作用结构域鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.5 ANXA2过表达对病毒生长的影响 | 第40-41页 |
| 3.2.6 ANXA2敲除对病毒生长的影响 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 4.1 EMCV 2A单克隆抗体结果分析 | 第43页 |
| 4.2 EMCV 2A蛋白与宿主蛋白ANXA2相互作用结果分析 | 第43-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第53页 |
