| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| ·条件致病性葡萄球菌研究概况 | 第8页 |
| ·微生物脂肪酶的应用 | 第8页 |
| ·脂肪酶活力的测定 | 第8-9页 |
| ·碱滴定法 | 第9页 |
| ·铜皂法 | 第9页 |
| ·对硝基苯酚法 | 第9页 |
| ·脂肪酶的催化特点 | 第9-10页 |
| ·非均相催化 | 第9页 |
| ·底物特异性 | 第9-10页 |
| ·微生物脂肪酶的分子生物学研究 | 第10-17页 |
| ·脂肪酶基因的克隆方法 | 第10-14页 |
| ·真菌脂肪酶 | 第14页 |
| ·葡萄球菌脂肪酶 | 第14-17页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第17-19页 |
| ·质粒表达载体 | 第18-19页 |
| ·表达宿主菌 | 第19页 |
| ·本课题的立题依据及研究内容 | 第19-20页 |
| ·立题依据 | 第19页 |
| ·主要研究内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-35页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·菌种和质粒 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器和设备 | 第21-22页 |
| ·培养基和溶液 | 第22-23页 |
| ·实验方法及步骤 | 第23-35页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079的培养 | 第23-24页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079分泌型脂肪酶的定性检测 | 第24页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079基因组DNA的提取 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第24-25页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079脂肪酶保守序列的测序 | 第25-26页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079脂肪酶保守序列的侧翼序列5’和3’端测序 | 第26-30页 |
| ·脂肪酶拼接序列的PCR扩增验证 | 第30页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079菌脂肪酶的克隆 | 第30-33页 |
| ·pET-28a(+)-mSHoL在大肠杆菌中的诱导表达 | 第33-35页 |
| 3 结果与讨论 | 第35-51页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079分泌型脂肪酶的定性检测 | 第35页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079脂肪酶保守序列的测序 | 第35-37页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079脂肪酶保守序列Ll的扩增 | 第35-36页 |
| ·保守序列L1的测序结果及序列分析 | 第36-37页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079脂肪酶保守序列侧翼序列的测序 | 第37-41页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079脂肪酶保守序列5’端序列L2的扩增 | 第37-39页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079脂肪酶保守序列3’端序列L3的扩增 | 第39-41页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079脂肪酶基因的测序结果及序列分析 | 第41-45页 |
| ·脂肪酶拼接序列的PCR扩增验证 | 第45-46页 |
| ·表达载体pET-28a(+)-mSHoL的构建 | 第46-50页 |
| ·人葡萄球菌GIMT1.079脂肪酶基因mSHoL的扩增 | 第46页 |
| ·T-A克隆 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pMD19-mSHoL的鉴定 | 第47页 |
| ·重组质粒的双酶切及目的片段回收 | 第47-48页 |
| ·农达载体pET-28a(+)-mSHoL的构建 | 第48-50页 |
| ·pET-28a(+)-mSHoL在大肠杆菌中的诱导表达 | 第50-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 5 展望 | 第52-53页 |
| 6 参考文献 | 第53-60页 |
| 7 论文发表情况 | 第60-61页 |
| 8 致谢 | 第61-62页 |
| 9 附录 | 第62-66页 |
