| 摘要 | 第10-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 番木瓜环斑病毒研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.1 番木瓜环斑病毒的发生与危害 | 第13页 |
| 1.1.2 PRSV的株系和症状 | 第13-14页 |
| 1.1.3 PRSV病毒粒子 | 第14页 |
| 1.1.4 PRSV寄主和传播途径 | 第14-15页 |
| 1.1.5 番木瓜环斑病毒病的防治 | 第15页 |
| 1.2 植物病毒的检测方法 | 第15-22页 |
| 1.2.1 生物学方法 | 第16页 |
| 1.2.2 电子显微镜 | 第16-17页 |
| 1.2.3 免疫学方法 | 第17-21页 |
| 1.2.4 免疫胶体金标记法 | 第21-22页 |
| 1.3 本项目的研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 实验药品 | 第23页 |
| 2.1.2 供试毒源,供试寄主 | 第23页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 生物学方法鉴定番木瓜环斑病毒株系 | 第24页 |
| 2.2.2 分子生物学鉴定番木瓜环斑病毒株系 | 第24-29页 |
| 2.3 PRSV纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.1 PRSV粗提纯 | 第29-30页 |
| 2.3.2 PRSV精提纯 | 第30页 |
| 2.3.3 提纯病毒的吸光值测定 | 第30页 |
| 2.3.4 电镜观察 | 第30页 |
| 2.3.5 病毒的外壳蛋白的SDS-PAGE | 第30页 |
| 2.4 PRSV抗血清的制备 | 第30-32页 |
| 2.4.1 PRSV免疫新西兰大白兔 | 第30-31页 |
| 2.4.2 PRSV抗血清效价测定 | 第31-32页 |
| 2.4.3 颈动脉取血 | 第32页 |
| 2.4.4 PRSV最适工作浓度的确定 | 第32页 |
| 2.5 PRSV抗体的纯化 | 第32-34页 |
| 2.5.1 辛酸-硫酸铵纯化抗体 | 第32-33页 |
| 2.5.2 Protein A柱亲和纯化PRSV抗体 | 第33页 |
| 2.5.3 纯化抗体浓度测定 | 第33页 |
| 2.5.4 抗体纯度鉴定 | 第33页 |
| 2.5.5 间接ELISA测定IgG效价 | 第33-34页 |
| 2.6 胶体金免疫层析试纸条的制备 | 第34-39页 |
| 2.6.1 器皿的处理 | 第34页 |
| 2.6.2 柠檬酸钠法还原制备胶体金 | 第34页 |
| 2.6.3 胶体金质量鉴定 | 第34页 |
| 2.6.4 金标抗体的制备与纯化 | 第34-35页 |
| 2.6.5 胶体金探针的质量鉴定 | 第35-36页 |
| 2.6.6 胶体金标记抗体条件的优化 | 第36页 |
| 2.6.7 试纸条材料的选择 | 第36-37页 |
| 2.6.8 组装试纸条 | 第37页 |
| 2.6.9 试纸条的检测方法和结果判断 | 第37-38页 |
| 2.6.10 试纸条的性能测试 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-57页 |
| 3.1 生物学方法鉴定番木瓜环斑病毒株系 | 第39-41页 |
| 3.2 分子生物学方法鉴定番木瓜环斑病毒株系 | 第41-42页 |
| 3.2.1 提取的总RNA质量的鉴定 | 第41页 |
| 3.2.2 目的片段的扩增 | 第41-42页 |
| 3.2.3 重组克隆载体的构建及鉴定 | 第42页 |
| 3.2.4 PRSV-CP基因序列的测定及其同源性的比较 | 第42页 |
| 3.3 PRSV的提纯与抗血清的制备 | 第42-46页 |
| 3.3.1 30%蔗糖硫酸铯精提纯PRSV | 第42-43页 |
| 3.3.2 提纯PRSV粒体电镜观察 | 第43页 |
| 3.3.3 提纯PRSV病毒的紫外吸收 | 第43-44页 |
| 3.3.4 提纯病毒蛋白电泳 | 第44页 |
| 3.3.5 抗血清效价的测定 | 第44-45页 |
| 3.3.6 最适合工作浓度确定 | 第45-46页 |
| 3.4 PRSV抗体纯化检测结果 | 第46-48页 |
| 3.5 胶体金免疫层析试纸条的制备 | 第48-57页 |
| 3.5.1 胶体金的制备 | 第48-50页 |
| 3.5.2 胶体金标记抗体制备及质量鉴定 | 第50-53页 |
| 3.5.2.2 最佳标记蛋白量确定 | 第51-53页 |
| 3.5.3 胶体金标记探针、检测线抗体、质控线抗体工作浓度的确定 | 第53-54页 |
| 3.5.4 试纸条材料的选择 | 第54页 |
| 3.5.5 胶体金试纸条的组装与测试 | 第54-55页 |
| 3.5.6 胶体金试纸条性能测试 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 番木瓜环斑病毒株系的鉴定 | 第57-58页 |
| 4.2 PRSV纯化 | 第58页 |
| 4.3 抗体的纯化方式 | 第58-59页 |
| 4.4 胶体金的选择 | 第59-60页 |
| 4.5 胶体金标记条件的优化 | 第60页 |
| 4.6 上样的方式 | 第60-61页 |
| 总结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
