| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 1 前言 | 第15-29页 |
| ·超氧化物歧化酶的种类与分布 | 第15-16页 |
| ·超氧化物歧化酶的结构和理化特性 | 第16-18页 |
| ·SOD 的结构 | 第16-18页 |
| ·SOD 的理化特性 | 第18页 |
| ·SOD 对氰化物和H_20_2 的敏感性 | 第18页 |
| ·SOD 的吸收光谱特性 | 第18页 |
| ·SOD 是亲水性的蛋白质 | 第18页 |
| ·SOD 基因的克隆和表达 | 第18-20页 |
| ·超氧化物歧化酶的功能及应用 | 第20-26页 |
| ·超氧化物歧化酶的功能 | 第20-23页 |
| ·SOD 对辐射的防护作用 | 第20-21页 |
| ·SOD 对肿瘤的作用 | 第21页 |
| ·SOD 与衰老 | 第21-22页 |
| ·SOD 与植物抗逆的关系 | 第22-23页 |
| ·超氧化物歧化酶的应用 | 第23-26页 |
| ·SOD 在化妆品领域中的应用 | 第23-24页 |
| ·SOD 在医学中的应用 | 第24-25页 |
| ·SOD 在食品工业中的应用前景 | 第25页 |
| ·SOD 与转基因植物 | 第25-26页 |
| ·选题的目的意义、研究内容 | 第26-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-61页 |
| ·实验材料 | 第29-34页 |
| ·菌株与质粒 | 第29页 |
| ·酶和生化试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·培养基及有关溶剂的配制 | 第30-34页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·溶液配制 | 第31-34页 |
| ·PCR 引物 | 第34页 |
| ·Mn-SOD 基因克隆表达引物 | 第34页 |
| ·Cu,Zn-SOD 基因表达引物 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-61页 |
| ·嗜热毛壳菌SOD 基因克隆 | 第34-39页 |
| ·嗜热毛壳菌菌丝体DNA 的抽提 | 第34-35页 |
| ·C.thermophilum Mn-SOD 基因 5′末端的分离(TAIL-PCR) | 第35-37页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| ·序列测定 | 第38页 |
| ·总RNA 的提取（Trizol 法） | 第38页 |
| ·反转录cDNA 第一链的合成 | 第38-39页 |
| ·目的基因全长cDNA 的克隆 | 第39页 |
| ·全长序列的生物信息学分析 | 第39页 |
| ·嗜热毛壳菌 SOD 基因在毕赤酵母中的表达、纯化与性质 | 第39-50页 |
| ·嗜热毛壳菌SOD 成熟肽基因序列的分离 | 第39-41页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第41页 |
| ·线性化质粒DNA 制备 | 第41-42页 |
| ·酵母转化 | 第42-43页 |
| ·酵母转化子的鉴定和筛选 | 第43-45页 |
| ·外源基因多拷贝整合转化子筛选 | 第45-46页 |
| ·酵母工程的培养和SOD 的诱导分泌表达 | 第46页 |
| ·表达产物的生物学活性检测及SDS-PAGE 分析 | 第46-47页 |
| ·重组酶的纯化及酶学性质 | 第47-50页 |
| ·工程酵母的抗逆性分析 | 第50页 |
| ·非胁迫处理 | 第50页 |
| ·胁迫处理 | 第50页 |
| ·嗜热毛壳菌sod（Ctsod）基因在烟草中的转化及抗盐性 | 第50-61页 |
| ·目的基因的克隆 | 第50-52页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第52页 |
| ·转化农杆菌 | 第52-54页 |
| ·农杆菌介导的烟草基因转化 | 第54-55页 |
| ·转基因烟草植株的分子生物学检测 | 第55-59页 |
| ·SOD 活性的测定 | 第59-60页 |
| ·转基因烟草的抗病性检测 | 第60页 |
| ·转基因烟草的抗盐性分析 | 第60-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-107页 |
| ·C.thermophilum CT2 sod 基因的克隆、表达及酶学性质 | 第61-84页 |
| ·C.thermophilum CT2 总RNA 的提取 | 第61页 |
| ·C.thermophilum CT2 mnsod 基因的克隆、表达及酶学性质 | 第61-75页 |
| ·C.thermophilum CT2 mnsod 基因5′末端的分离 | 第61-62页 |
| ·C.thermophilum CT2 mnsod 全长cDNA 的分离 | 第62-63页 |
| ·C.thermophilum CT2 mnsod 基因的核苷酸和氨基酸序列分析 | 第63-67页 |
| ·嗜热毛壳菌mnsod 基因在毕赤酵母中的高效表达 | 第67-72页 |
| ·重组Mn-SOD 的分离纯化及性质测定 | 第72-75页 |
| ·C.thermophilum CT2 czsod 基因的克隆、表达及酶学性质 | 第75-84页 |
| ·C.thermophilum CT2 czsod 基因cDNA 的分离 | 第75-76页 |
| ·C. thermophilum czsod 的核苷酸和氨基酸序列分析 | 第76-81页 |
| ·重组Cu,Zn-SOD 的分离纯化及性质测定 | 第81-84页 |
| ·工程酵母的抗逆性分析 | 第84-87页 |
| ·嗜热毛壳菌czsod 基因与逆境 | 第84-85页 |
| ·嗜热毛壳菌mnsod 基因与逆境 | 第85-87页 |
| ·嗜热毛壳菌sod（Ctsod）基因在烟草中的转化及抗盐性分析 | 第87-107页 |
| ·嗜热毛壳菌mnsod 转化烟草及抗盐性分析 | 第87-97页 |
| ·植物表达载体(pROKⅡ/mnsod)的构建 | 第87-89页 |
| ·转化农杆菌 | 第89页 |
| ·LBA4404(pROKⅡ/mnsod)转化烟草 | 第89-90页 |
| ·转基因烟草的分子检测 | 第90-92页 |
| ·转mnsod 基因烟草与非转基因烟草SOD 含量的测定 | 第92页 |
| ·转mnsod 基因烟草的抗病性分析 | 第92-94页 |
| ·转mnsod 基因烟草对盐胁迫的抗性 | 第94-97页 |
| ·嗜热毛壳菌czsod 基因转化烟草及抗盐性分析 | 第97-107页 |
| ·植物表达载体（pROKⅡ/czsod）的构建 | 第97-98页 |
| ·转化农杆菌 | 第98页 |
| ·LBA4404（pROKⅡ/czsod）转化烟草 | 第98-100页 |
| ·转基因烟草的分子检测 | 第100-102页 |
| ·转czsod 基因与非转基因烟草SOD 含量的测定 | 第102页 |
| ·转czsod 基因烟草的抗病性分析 | 第102-103页 |
| ·转 czsod 基因烟草对盐胁迫的抗性 | 第103-107页 |
| 4 讨论 | 第107-119页 |
| ·嗜热毛壳菌SOD 酶的高效表达及热稳定性研究 | 第107-112页 |
| ·表达系统的选择 | 第107-108页 |
| ·影响毕赤酵母高效表达的因素 | 第108-110页 |
| ·重组超氧化物歧化酶的纯化 | 第110页 |
| ·重组超氧化物歧化酶的热稳定性 | 第110-111页 |
| ·热稳定酶的耐热机制 | 第111-112页 |
| ·工程酵母抗非生物胁迫的研究 | 第112-113页 |
| ·转嗜热毛壳菌sod 基因烟草的抗盐性研究 | 第113-119页 |
| ·自由基、活性氧对植物的伤害 | 第113-114页 |
| ·野生型与转嗜热毛壳菌sod 基因烟草对盐胁迫抗性的比较 | 第114-116页 |
| ·盐胁迫下野生型与转sod 基因烟草的丙二醛（MDA）含量比较 | 第116-117页 |
| ·野生型与转sod 基因烟草抗病性比较 | 第117-119页 |
| 5 结论 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第135页 |
