| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 英文缩略语索引 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-25页 |
| 1.1 棉花纤维的结构与发育过程 | 第15-17页 |
| 1.1.1 棉花纤维的结构 | 第15页 |
| 1.1.2 棉花纤维发育过程 | 第15-17页 |
| 1.2 棉花纤维发育相关基因的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3 植物脂质转运蛋白的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.3.1 植物脂质转运蛋白的结构 | 第19-20页 |
| 1.3.2 植物脂质转运蛋白的分类 | 第20页 |
| 1.3.3 植物脂质转运蛋白的生物学功能 | 第20-22页 |
| 1.3.3.1 植物脂质转运蛋白的脂质转运活性研究 | 第21页 |
| 1.3.3.2 植物脂质转运蛋白的抗病活性研究 | 第21-22页 |
| 1.3.3.3 植物脂质转运蛋白的抗逆活性研究 | 第22页 |
| 1.3.3.4 植物脂质转运蛋白在植物生殖发育过程中的作用研究 | 第22页 |
| 1.3.4 棉花脂质转运蛋白基因的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的目的及实验技术路线图 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第25-26页 |
| 2.1.3 酶、试剂盒 | 第26页 |
| 2.1.4 相关引物序列 | 第26页 |
| 2.1.5 主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.1.6 部分试剂及培养基的配制 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-42页 |
| 2.2.1 陆地棉LTP基因家族成员的克隆 | 第27-29页 |
| 2.2.1.1 棉花总DNA的提取和纯化 | 第27页 |
| 2.2.1.2 棉花LTP基因家族的克隆与鉴定 | 第27-29页 |
| 2.2.1.3 陆地棉LTP基因家族11个成员DNA序列的生物学分析 | 第29页 |
| 2.2.2 陆地棉LTP基因家族成员的表达分析 | 第29-32页 |
| 2.2.2.1 棉花胚珠不同组织RNA的提取与cDNA的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.2.2 棉花LTP基因家族的表达分析 | 第31-32页 |
| 2.2.3 陆地棉LTP6基因植物表达载体构建及转化 | 第32-34页 |
| 2.2.3.1 Gh-LTP6基因植物表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.3.2 农杆菌的获得 | 第33-34页 |
| 2.2.3.3 转基因拟南芥的获得与筛选 | 第34页 |
| 2.2.4 陆地棉LTP6基因的启动子的克隆与表达分析 | 第34-37页 |
| 2.2.4.1 陆地棉LTP6启动子片段的获得与鉴定 | 第34-36页 |
| 2.2.4.2 植物表达载体的构建与农杆菌的获得 | 第36-37页 |
| 2.2.4.3 转基因拟南芥的GUS活性组织化学染色 | 第37页 |
| 2.2.5 Gh-LTP6基因启动子与转录因子Myb25和Myb2的酵母单杂交 | 第37-39页 |
| 2.2.5.1 Myb25-pB42AD、Myb2-pB42AD、LTP6Promoter-p178载体构建 | 第38-39页 |
| 2.2.5.2 酵母转化实验 | 第39页 |
| 2.2.5.3 酵母转化定性实验 | 第39页 |
| 2.2.6 Gh-LTP6基因原核表达载体的构建以及融合蛋白的表达 | 第39-40页 |
| 2.2.6.1 Gh-LTP6-pMAL原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.6.2 Gh-LTP6-pMAL融合蛋白的表达 | 第40页 |
| 2.2.6.3 SDS-PAGE检测融合蛋白的表达 | 第40页 |
| 2.2.7 Gh-LTPG原核表达载体的构建以及融合蛋白与脂质膜的结合 | 第40-42页 |
| 2.2.7.1 Gh-LTPG-pGEX 4T-3原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.7.2 Gh-LTPG/GST融合蛋白的表达纯化 | 第41页 |
| 2.2.7.3 Gh-LTPG/GST融合蛋白与脂质膜结合实验 | 第41-42页 |
| 第三章 实验结果分析 | 第42-66页 |
| 3.1 陆地棉LTP基因家族成员的克隆 | 第42-46页 |
| 3.1.1 陆地棉基因组DNA的提取 | 第42页 |
| 3.1.2 陆地棉LTP基因家族的克隆 | 第42-43页 |
| 3.1.3 陆地棉LTP基因家族11个成员的同源及进化比对 | 第43-46页 |
| 3.2 陆地棉LTP基因家族成员的表达分析 | 第46-49页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第46页 |
| 3.2.2 Gh-LTP基因家族在棉胚起始发育时期表达的定量分析 | 第46-48页 |
| 3.2.3 Gh-LTP6基因在棉花不同组织中的表达分析 | 第48-49页 |
| 3.3 陆地棉LTP6基因植物表达载体构建及转化 | 第49-52页 |
| 3.3.1 陆地棉LTP6基因植物表达载体的构建 | 第49-51页 |
| 3.3.2 转基因植株的筛选及PCR阳性检测 | 第51页 |
| 3.3.3 转基因植株的表型分析 | 第51-52页 |
| 3.4 陆地棉LTP6基因的启动子的克隆与表达分析 | 第52-58页 |
| 3.4.1 陆地棉LTP6基因的启动子嵌套PCR结果 | 第52-53页 |
| 3.4.2 目的片段的回收及测序 | 第53-54页 |
| 3.4.3 Gh-LTP6基因启动子的生物信息学分析 | 第54-56页 |
| 3.4.4 植物表达载体pCAMBIA1305-GhLTP6pro的构建 | 第56-58页 |
| 3.4.5 含有植物表达载体pCAMBIA1305-GhLTP6pro农杆菌GV3101的获得 | 第58页 |
| 3.4.6 抗性植株的获得 | 第58页 |
| 3.5 Gh-LTP6基因启动子与 Myb25、Myb2转录因子的酵母单杂交 | 第58-61页 |
| 3.5.1 酵母单杂交载体的构建 | 第58-60页 |
| 3.5.2 酵母单杂交定性结果 | 第60-61页 |
| 3.6 原核表达载体的构建以及融合蛋白的表达分析 | 第61-66页 |
| 3.6.1 LTP6-pMAL与LTPG-pGEX4T-3原核表达载体的构建 | 第61-63页 |
| 3.6.2 LTP6-pMAL融合蛋白的表达分析 | 第63页 |
| 3.6.3 LTPG/GST融合蛋白的表达及纯化 | 第63-64页 |
| 3.6.4 LTPG/GST融合蛋白与脂质膜的结合 | 第64-66页 |
| 第四章 讨论和小结 | 第66-70页 |
| 4.1 讨论 | 第66-68页 |
| 4.2 创新点 | 第68-69页 |
| 4.3 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-81页 |
| 附录1 本研究中所使用的引物序列 | 第81-84页 |
| 附录2 部分试剂及培养基的配制 | 第84-88页 |
| 附录3 陆地棉LTP基因家族DNA序列 | 第88-93页 |
| 附录4 基因组DNA的提取方法 | 第93-95页 |
| 附录5 大肠杆菌及农杆菌的转化方法 | 第95-97页 |
| 附录6 棉花RNA的提取方法 | 第97-99页 |
| 附录7 质粒提取及胶回收方法 | 第99-100页 |
| 附录8 拟南芥的侵染及筛选 | 第100-101页 |
| 附录9 酵母感受态细胞的制备及转化 | 第101-102页 |
| 附录10 SDS-PAGE操作方法 | 第102-103页 |
| 附录11 融合蛋白的诱导及纯化 | 第103-105页 |
| 附录12 Gh-LTPG蛋白与Membrane Lipid StripsTM的结合 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文及专利 | 第107页 |
