| 中文摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 前言 | 第16-34页 |
| 1.1 稻瘟菌及疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)研究综述 | 第16-27页 |
| 1.1.1 稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)概述 | 第16-18页 |
| 1.1.2 疏绵状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)概述 | 第18-22页 |
| 1.1.3 稻瘟菌(M.oryzae)及疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus)遗传转化体系的建立 | 第22-27页 |
| 1.2 ATP依赖型Lon蛋白酶的功能研究概述 | 第27-31页 |
| 1.2.1 原核生物Lon蛋白酶的功能研究 | 第27-29页 |
| 1.2.2 真核生物线粒体Lon蛋白酶的功能研究 | 第29-30页 |
| 1.2.3 真核生物过氧化物酶体Lon蛋白酶的功能研究 | 第30-31页 |
| 1.3 本论文的研究内容及意义 | 第31-34页 |
| 第2章 稻瘟菌ATP-Lon蛋白酶(MAP2)功能研究 | 第34-68页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-42页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第34-35页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第35页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.4 载体与引物 | 第36-37页 |
| 2.1.5 试验所用培养基 | 第37-40页 |
| 2.1.6 试验所用储备液及配制方法 | 第40-42页 |
| 2.2 研究方法 | 第42-57页 |
| 2.2.1 稻瘟菌MAP2生物信息学分析 | 第42页 |
| 2.2.2 稻瘟菌基因组DNA的提取 | 第42-44页 |
| 2.2.3 稻瘟菌RNA的提取与反转录生成1 st-Strand cDNA | 第44-46页 |
| 2.2.4 细菌质粒DNA的提取 | 第46-47页 |
| 2.2.5 质粒DNA的酶切与连接 | 第47-49页 |
| 2.2.6 大肠杆菌DH5α热激感受态的制备与转化 | 第49-50页 |
| 2.2.7 根癌土壤农杆菌AGL-1热激感受态的制备与转化 | 第50-51页 |
| 2.2.8 MAP2敲除载体的构建 | 第51-52页 |
| 2.2.9 稻瘟菌的遗传转化 | 第52-54页 |
| 2.2.10 稻瘟菌突变体的检测与确认 | 第54-55页 |
| 2.2.11 菌株营养生长与菌落形态观察 | 第55页 |
| 2.2.12 菌株产孢量的测定 | 第55页 |
| 2.2.13 菌株附着胞形成观察 | 第55-56页 |
| 2.2.14 MAP2基因与稻瘟病菌H202的逆境应答 | 第56页 |
| 2.2.15 MAP2基因与稻瘟病菌细胞壁完整性和渗透逆境应答 | 第56页 |
| 2.2.16 ΔMAP2突变体的致病性分析 41 | 第56页 |
| 2.2.17 洋葱表皮细胞侵染观察 | 第56-57页 |
| 2.3 结果与分析 | 第57-66页 |
| 2.3.1 稻瘟菌MAP2基因的获得及序列比对 | 第57-58页 |
| 2.3.2 稻瘟菌MAP2基因的氨基酸序列保守结构域的预测与分析 | 第58-59页 |
| 2.3.3 稻瘟菌MAP2基因的氨基酸序列的同源性和进化分析 | 第59-60页 |
| 2.3.4 稻瘟菌MAP2敲除载体的构建与验证 | 第60-61页 |
| 2.3.5 MAP2敲除突变体的检测及获得 | 第61-62页 |
| 2.3.6 MAP2基因的缺失不影响稻瘟菌营养生长 | 第62-63页 |
| 2.3.7 MAP2基因的缺失不影响稻瘟菌生殖生长和附着胞的形成 | 第63-64页 |
| 2.3.8 MAP2基因不参与稻瘟菌的逆境应答 | 第64-65页 |
| 2.3.9 MAP2基因与稻瘟菌的致病性无关 | 第65-66页 |
| 2.4 讨论 | 第66-68页 |
| 第3章 疏绵状嗜热丝孢菌Mlon和Plon基因的获得及生物信息学分析 | 第68-82页 |
| 3.1 材料与方法 | 第68-69页 |
| 3.1.1 材料 | 第68-69页 |
| 3.1.2 方法 | 第69页 |
| 3.2 结果与分析 | 第69-80页 |
| 3.2.1 疏绵状嗜热丝孢菌lon基因的获得及序列比对 | 第69-71页 |
| 3.2.2 疏绵状嗜热丝孢菌lon基因的氨基酸序列保守结构域的预测与分析 | 第71-72页 |
| 3.2.3 疏绵状嗜热丝孢菌lon基因的氨基酸序列的同源性和进化分析 | 第72页 |
| 3.2.4 疏绵状嗜热丝孢菌1on蛋白的亚细胞定位预测与分析 | 第72-73页 |
| 3.2.5 疏绵状嗜热丝孢菌Mlon及Plon蛋白质基本理化性质的预测与分析 | 第73-74页 |
| 3.2.6 疏绵状嗜热丝孢菌Mlon及Plon蛋白质跨膜结构域的预测与分析 | 第74-75页 |
| 3.2.7 疏绵状嗜热丝孢菌Mlon及Plon蛋白质二级结构的预测与分析 | 第75页 |
| 3.2.8 疏绵状嗜热丝孢菌Mlon及Plon蛋白质卷曲螺旋结构的预测与分析 | 第75-78页 |
| 3.2.9 疏绵状嗜热丝孢菌Mlon及Plon蛋白质三维结构的预测与分析 | 第78-80页 |
| 3.3 讨论 | 第80-82页 |
| 第4章 疏绵状嗜热丝孢菌中Mlon和Plon基因的敲除、互补及Mlon和Plon蛋白的亚细胞定位 | 第82-108页 |
| 4.1 实验材料 | 第83-86页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第83页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第83页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第83页 |
| 4.1.4 载体与引物 | 第83-85页 |
| 4.1.5 试验所用培养基 | 第85-86页 |
| 4.1.6 试验所用储备液及配制方法 | 第86页 |
| 4.2 研究方法 | 第86-98页 |
| 4.2.1 疏绵状嗜热丝孢菌基因组DNA的提取 | 第86页 |
| 4.2.2 疏绵状嗜热丝孢菌RNA的提取与反转录生成1 st-Strand c DNA | 第86-87页 |
| 4.2.3 细菌质粒DNA的提取 | 第87页 |
| 4.2.4 质粒DNA的酶切与连接 | 第87页 |
| 4.2.5 大肠杆菌DH5a热激感受态的制备与转化 | 第87页 |
| 4.2.6 土壤农杆菌AGL-1热激感受态的制备与转化 | 第87页 |
| 4.2.7 Mlon和Plon敲除载体、互补载体/亚细胞定位载体的构建 | 第87-91页 |
| 4.2.8 疏绵状嗜热丝孢菌Mlon蛋白亚细胞定位分析方法 | 第91-92页 |
| 4.2.9 疏绵状嗜热丝孢菌Plon蛋白亚细胞定位分析方法 | 第92页 |
| 4.2.10 疏绵状嗜热丝孢菌的遗传转化 | 第92-97页 |
| 4.2.11 疏绵状嗜热丝孢菌突变体的检测与确认 | 第97-98页 |
| 4.3 结果与分析 | 第98-106页 |
| 4.3.1 Mlon基因敲除载体及互补/亚细胞定位载体的构建与验证 | 第98-100页 |
| 4.3.2 Plon基因敲除载体及互补/亚细胞定位载体的构建与验证 | 第100-102页 |
| 4.3.3 Mlon和Plon敲除突变体的检测及获得 | 第102-105页 |
| 4.3.4 Mlon和Plon互补/亚细胞定位菌株的获得 | 第105-106页 |
| 4.4 讨论 | 第106-108页 |
| 第5章 Mlon和Plon基因在疏绵状嗜热丝孢菌生长发育及逆境自我保护中的功能分析 | 第108-134页 |
| 5.1 实验材料 | 第108-109页 |
| 5.1.1 供试菌株 | 第108页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第108页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第108-109页 |
| 5.1.4 引物 | 第109页 |
| 5.1.5 试验所用培养基 | 第109页 |
| 5.1.6 试验所用储备液及配制方法 | 第109页 |
| 5.2 研究方法 | 第109-115页 |
| 5.2.1 菌株营养生长与菌落形态观察 | 第109-110页 |
| 5.2.2 菌株在不同温度培养条件下菌落形态观察 | 第110页 |
| 5.2.3 菌株菌丝干重的测定 | 第110页 |
| 5.2.4 菌株产孢量的测定 | 第110-111页 |
| 5.2.5 菌株孢子萌发数的测定 | 第111页 |
| 5.2.6 Mlon、Plon基因在不同培养时间下的表达变化 | 第111-112页 |
| 5.2.7 Mlon、Plon基因在不同培养温度下的表达变化 | 第112页 |
| 5.2.8 菌株H_2O_2敏感性测定 | 第112-113页 |
| 5.2.9 菌株DAB染色 | 第113页 |
| 5.2.10 菌株中H_2O_2含量测定 | 第113-115页 |
| 5.2.11 菌株细胞壁完整的研究 | 第115页 |
| 5.2.12 菌株对渗透胁迫的研究 | 第115页 |
| 5.3 结果与分析 | 第115-128页 |
| 5.3.1 Plon的缺失影响疏绵状嗜热丝孢菌的营养生长 | 第115-117页 |
| 5.3.2 Mlon、Plon基因不是疏绵状嗜热丝孢菌维持其嗜热生长所必须的 | 第117-119页 |
| 5.3.3 Mlon的缺失影响疏绵状嗜热丝孢菌的生殖生长 | 第119-120页 |
| 5.3.4 低温促进Mlon和Plon基因的表达 | 第120-121页 |
| 5.3.5 培养时间对Mlon和Plon基因表达的影响 | 第121-123页 |
| 5.3.6 Plon的缺失影响疏绵状嗜热丝孢菌的活力 | 第123-124页 |
| 5.3.7 ΔMlon、ΔPlon对H_2O_2的敏感性增强 | 第124-126页 |
| 5.3.8 Mlon、Plon的缺失影响疏绵状嗜热丝孢菌细胞壁完整性 | 第126-127页 |
| 5.3.9 Mlon、Plon的缺失不影响疏绵状嗜热丝孢菌的渗透压敏感性 | 第127-128页 |
| 5.4 讨论 | 第128-134页 |
| 第6章 全文研究结论 | 第134-137页 |
| 参考文献 | 第137-147页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第147-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
