| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 符号和缩略语说明 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 第一节 金针菇的概述 | 第14-16页 |
| 1.1 金针菇的分类地位 | 第14页 |
| 1.2 金针菇的组成部分 | 第14-15页 |
| 1.2.1 金针菇菌盖形态特征 | 第15页 |
| 1.2.2 金针菇菌褶形态特征 | 第15页 |
| 1.2.3 金针菇菌柄形态特征 | 第15页 |
| 1.3 金针菇营养价值 | 第15-16页 |
| 1.4 金针菇药用价值 | 第16页 |
| 1.4.1 金针菇具有免疫调节作用 | 第16页 |
| 1.4.2 金针菇具有护肝作用 | 第16页 |
| 1.4.3 金针菇具有抗肿瘤作用 | 第16页 |
| 第二节 脂质体介导的遗传转化研究进展 | 第16-18页 |
| 2.1 目前丝状真菌中主要的遗传转化方法 | 第16-17页 |
| 2.1.1 农杆菌介导的转化法 | 第17页 |
| 2.1.2 电击法 | 第17页 |
| 2.1.3 限制酶介导的DNA整合法 | 第17页 |
| 2.2 脂质体转化方法的简介 | 第17-18页 |
| 2.3 金针菇中遗传转化方法的研究 | 第18页 |
| 第三节 漆酶基因家族的简介 | 第18-20页 |
| 3.1 漆酶的命名和分类 | 第18-19页 |
| 3.2 漆酶的特性 | 第19-20页 |
| 3.3 漆酶基因家族与菌丝生长、子实体形成有关 | 第20页 |
| 第四节 本论文的研究内容及意义 | 第20-22页 |
| 4.1 研究意义 | 第20-21页 |
| 4.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 脂质体介导的金针菇遗传转化体系的建立 | 第22-34页 |
| 前言 | 第22页 |
| 1 实验材料 | 第22-23页 |
| 1.1 菌株、质粒、试剂 | 第22-23页 |
| 1.2 菌株培养条件 | 第23页 |
| 2 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.1 金针菇原生质体的制备 | 第23页 |
| 2.2 脂质体介导的金针菇转化体系 | 第23-24页 |
| 2.3 金针菇电击转化体系 | 第24页 |
| 2.4 农杆菌介导的金针菇转化体系 | 第24-25页 |
| 2.5 金针菇转化子的分子水平验证 | 第25页 |
| 2.6 GFP报告基因的检测 | 第25-26页 |
| 2.7 金针菇转化子有丝分裂稳定性验证 | 第26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-31页 |
| 3.1 潮霉素抗性浓度筛选结果 | 第26-27页 |
| 3.2 脂质体转化结果 | 第27-28页 |
| 3.3 潮霉素扩增验证随机挑取的转化子 | 第28页 |
| 3.4 转化子绿色荧光的检测 | 第28-29页 |
| 3.5 金针菇脂质体转化子有丝分裂稳定性验证 | 第29页 |
| 3.6 金针菇三种转化方法转化效率的比较 | 第29-30页 |
| 3.7 金针菇三种转化方法转化子获得的时间比较 | 第30-31页 |
| 4 本章讨论 | 第31-34页 |
| 第三章 漆酶基因对金针菇生长发育的影响 | 第34-60页 |
| 前言 | 第34页 |
| 1 实验材料 | 第34-35页 |
| 1.1 实验菌株和试剂 | 第34-35页 |
| 1.2 菌株培养条件 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-43页 |
| 2.1 金针菇基因组DNA的提取(CTAB法) | 第35页 |
| 2.2 金针菇总RNA的提取和cDNA的反转录 | 第35-37页 |
| 2.3 Lac2i沉默载体的构建 | 第37-38页 |
| 2.3.1 Lac2i沉默片段的克隆 | 第37-38页 |
| 2.3.2 Lac2沉默目的片段双酶切和目的片段的回收 | 第38页 |
| 2.3.3 Lac2沉默质粒的构建 | 第38页 |
| 2.4 Lac2过表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 2.4.1 金针菇cDNA的合成 | 第38页 |
| 2.4.2 Lac2的全长扩增 | 第38-39页 |
| 2.4.3 载体Fv-GPIE和目的片段的双酶切反应 | 第39页 |
| 2.4.4 目的片段的回收与克隆 | 第39页 |
| 2.4.5 片段与载体的连接 | 第39页 |
| 2.5 Lac2基因沉默载体和过表达载体的脂质体转化 | 第39页 |
| 2.6 转化子的筛选及PCR验证 | 第39-40页 |
| 2.6.1 金针菇DNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.6.2 转化子的PCR验证 | 第40页 |
| 2.7 转化子中Lac2基因mRNA水平表达量的影响 | 第40-41页 |
| 2.7.1 金针菇总RNA的提取及cDNA制备 | 第40页 |
| 2.7.2 荧光定量PCR检测转化子沉默效率和过表达效率 | 第40-41页 |
| 2.8 漆酶活性测定 | 第41-42页 |
| 2.8.1 平板检测法 | 第41页 |
| 2.8.2 分光光度法测定漆酶的活性 | 第41-42页 |
| 2.9 纤维素酶活性检测 | 第42页 |
| 2.10 漆酶基因Lac2转化子在生长方面的变化 | 第42页 |
| 2.10.1 不同转化子在平板上的生长差异 | 第42页 |
| 2.10.2 不同转化子在液体发酵中生物量的变化 | 第42页 |
| 2.11 漆酶基因Lac2沉默和过表达转化子的吃料实验 | 第42-43页 |
| 2.11.1 培养料的配制 | 第42-43页 |
| 2.11.2 不同转化子吃料能力的比较 | 第43页 |
| 2.12 漆酶基因Lac2沉默和过表达转化子出原基情况 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-57页 |
| 3.1 金针菇中的漆酶序列 | 第43页 |
| 3.2 金针菇不同漆酶在发酵过程中转录水平差异分析 | 第43-44页 |
| 3.3 金针菇中漆酶序列相似性比较 | 第44-47页 |
| 3.4 金针菇漆酶沉默和过表达载体构建过程中部分电泳图 | 第47-49页 |
| 3.4.1 金针菇总RNA的获得 | 第47-48页 |
| 3.4.2 金针菇Lac2沉默片段的获取 | 第48页 |
| 3.4.3 金针菇Lac2全长序列的获取 | 第48-49页 |
| 3.5 漆酶基因Lac2转化子的分子水平验证 | 第49-50页 |
| 3.6 漆酶基因Lac2、Lac3、Lac4在转化子中转录水平的变化 | 第50-51页 |
| 3.7 漆酶基因Lac2的沉默转化子和过表达转化子中漆酶活性的变化 | 第51-53页 |
| 3.7.1 平板检测法 | 第51-52页 |
| 3.7.2 分光光度法测定漆酶活性 | 第52-53页 |
| 3.8 漆酶基因的沉默转化子和过表达转化子中纤维素酶活性的变化 | 第53-54页 |
| 3.9 漆酶基因Lac2沉默转化子和过表达转化子在平板上的生长差异 | 第54页 |
| 3.10 漆酶基因Lac2沉默转化子和过表达转化子生物量的变化 | 第54-55页 |
| 3.11 漆酶基因Lac2沉默转化子和过表达转化子吃料实验 | 第55-57页 |
| 3.12 漆酶基因Lac2沉默转化子和过表达转化子原基发生实验 | 第57页 |
| 4 本章讨论 | 第57-60页 |
| 全文总结 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
